HCMV UL148基因mRNA的表达时相及EGS对其表达的抑制

摘要

目的:
　　研究HCMV UL148基因表达及其mRNA表达时相；在此基础上选取高表达时点，研究EGS对HCMV UL148基因表达的抑制作用。
　　方法：
　　1.将 HCMV接种于生长状态良好的人包皮成纤维细胞（HFF），通过观察细胞形态变化及应用多重PCR的方法鉴定HCMV的感染；
　　2.根据HCMV基因时序表达（IE、E、LA），选择感染后的不同时间点（2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、96h）收获细胞总RNA，利用RT-PCR和荧光定量PCR方法鉴定UL148 mRNA的表达时相；
　　3.合成以UL148 mRNA为靶基因的EGS（D-EGS）和无效的C-EGS，转染至感染HCMV的HFF细胞，同时在前一步的基础上，选择UL148基因的高表达时点，收集细胞总RNA，应用荧光定量PCR的方法研究EGS对HCMV UL148基因表达的抑制作用。
　　结果：
　　1. HCMV感染HFF细胞48h后细胞出现病变效应，经多重PCR鉴定，HCMV成功感染HFF细胞；
　　2. HCMV UL148 mRNA于感染后12h开始表达，感染后24h表达量明显增加，在随后的48h、72h水平稳定表达，96h达到峰值；
　　3.转染100nM EGS时，D-EGS能明显抑制细胞内病毒UL148 mRNA的表达，抑制效率可达72％±1.37%，而无效的C-EGS对UL148 mRNA的表达无明显影响。
　　结论：
　　1.初步鉴定UL148基因为HCMV基因的晚期基因；
　　2.特异性EGS可有效抑制HCMV UL148基因的表达；
　　3. EGS对HCMV UL148基因有明显的抑制作用，有望发展为新型抗HCMV反义核酸药物。

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缩略词表

第一章 前言

1. HCMV简介

2. HCMV的流行病学特征

3. HCMV病毒学特征

4. HCMV UL/b’区域研究现状

5. UL148基因的简介及研究现状

6. 关于外部引导序列（EGS）技术

7. 本课题研究的意义

第二章技术路线

第三章 仪器及材料

1. 主要仪器

2. 实验材料

第四章 研究内容

1．HFF细胞培养

2．HCMV病毒的培养与鉴定

3．HCMV UL148基因表达及mRNA表达时相鉴定

4．鉴定EGS对UL148基因的抑制作用

第五章 结果与分析

1．HFF细胞的培养

2．病毒的培养与鉴定

3．HCMV总RNA的提取结果

4．HCMV UL148基因表达及mRNA表达时相

5．EGS对HCMV UL148基因表达的抑制作用

第六章 讨论

1．HCMV感染的鉴定

2．RNA样品中基因组DNA污染的处理

3．UL148基因表达及mRNA表达时相

4．EGS在UL148基因表达过程中的作用时点

5．EGS对HCMV UL148基因表达的抑制

6．EGS沉默UL148基因表达后对病毒的影响

第七章 结论和展望

1．结论

2．研究展望

参考文献

综述

附录

研究生期间发表论文

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