二亚硝基哌嗪(DNP)诱导AGR2基因表达参与鼻咽癌侵袭转移的分子机制

摘要

目的：
　　本文分析二亚硝基哌嗪(N,N’-Dinitrosopiperazine。DNP)对鼻咽癌细胞侵袭转移和AGR2(Anterior gradient2)、CTSB(Cathepsin B)和CTSD(Cathepsin D)基因表达的影响，探讨DNP调控AGR2、CTSB和CTSD表达参与鼻咽癌侵袭和转移的分子机制。
　　方法：
　　1.以低转移潜能鼻咽癌细胞6-10B和高转移潜力鼻咽癌细胞5-8F作为实验材料。用DNP（100μM）处理鼻咽癌细胞6-10B,以0.1％DMSO（DNP溶剂）处理细胞作为对照，检测细胞侵袭迁移能力。
　　2.采用细胞划痕实验分析DNP对6-10B细胞迁移能力的影响。
　　3.采用Transwell实验检测DNP处理鼻咽癌细胞6-10B后，细胞的侵袭转移能力。
　　4.采用 Real-time PCR技术检测 DNP处理鼻咽癌细胞6-10B细胞 AGR2、CTSB和CTSD基因的表达。
　　5.采用SPSS13.0分析实验数据。
　　结果：
　　1.划痕实验分析DNP处理鼻咽癌细胞6-10B迁移能力，结果显示DNP处理组细胞迁移至中央划痕区的数量明显多于对照组，细胞迁移能力显著增强。
　　2.Transwell实验分析DNP对鼻咽癌细胞6-10B侵袭转移能力，实验结果显示DNP处理组鼻咽癌6-10B细胞24h内穿过滤过膜细胞数显著多于对照组细胞，6-10B细胞迁移和侵袭能力显著增强。
　　3. Real-time PCR分析DNP处理6-10B细胞AGR2、CTSB和CTSD基因表达，结果显示DNP处理6-10B细胞AGR2、CTSB和CTSD基因相对表达量分别为1.54±0.06(P<0.05)，0.80±0.07(P>0.05)和0.84±0.10(P>0.05)；高转移鼻咽癌细胞5-8F AGR2、CTSB和CTSD基因相对表达量分别为1.93±0.52(P<0.05)，1.39±0.25(P>0.05)和1.32±0.11(P>0.05)。DNP处理组AGR2基因表达显著高于对照组，而DNP处理6-10B细胞对CTSB和CTSD基因表达无明显影响。高转移鼻咽癌细胞5-8F AGR2基因表达显著高于低转移鼻咽癌细胞6-10B。
　　结论：
　　鼻咽癌细胞AGR2基因高表达与鼻咽癌转移能力有关，DNP诱导AGR2基因转录可能是鼻咽癌高转移重要因素之一。DNP处理对CTSB与CTSD基因转录无明显影响。

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目录

第一章 前言

1 鼻咽癌概述

2 AGR2概述

第二章 技术路线

第三章 实验材料

3.1细胞株

3.2化学致癌物DNP

3.3实验试剂

3.4实验耗材

3.5仪器与设备

3.6引物、探针序列

3.7试剂配制

第四章 实验方法

4.1细胞培养

4.2细胞划痕实验

4.3Transwell实验

4.4 实时荧光定量PCR

4.5统计学处理

第五章 实验结果

5.1细胞划痕实验结果

5.2 Transwell迁移实验

5.3Transwell侵袭实验

5.4 Real-time PCR结果

第六章 讨论

6.1鼻咽癌临床特征

6.2鼻咽癌转移机制

6.3 AGR2、CTSB和CTSD与肿瘤转移

6.4 DNP促进鼻咽癌转移的分子机制

第七章 结论

参考文献

缩略词表

综述: MICAL家族与肿瘤侵袭转移

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