番荔枝果肉多糖的分离纯化、结构表征及体外活性初步研究

摘要

番荔枝（Annona squamosa）系番荔枝科番荔枝属植物，源于印度和南美洲，现广泛分布于泰国、印度、中国等热带地区。番荔枝除作为热带名果之外，民间还常用于治疗痢疾、昏厥、传染病、便秘、出血、发烧、恶性肿瘤和溃疡等。番荔枝果实具有多种药用性质，如抗氧化性、降血糖、保肝、抗肿瘤和抗炎等。
　　本文以台湾所产番荔枝为研究对象，首次对番荔枝果肉多糖进行提取、分离纯化、结构表征、硫酸化修饰、抗氧化和免疫调节进行了较系统研究。采用水提取、碱提取、酸提取，经过分级醇沉、除蛋白、除色素、透析及冻干，获得六种粗多糖，分别命名为ASPW50、ASPW80、ASPW90、ASPB80、ASPA50和ASPA80。番荔枝粗多糖经DEAE-Cellulose52阴离子交换柱、Sephadex G-100柱和Sephacryl S-300HR柱分离纯化得到四种精多糖，分别命名为 ASPW80-1、ASPW90-1、ASPB80-1和 ASPA80-1。采用紫外扫描法、比旋光度法和高效凝胶渗透色谱法检测其纯度，发现四种精多糖纯度良好，均不含有蛋白质和核酸。经苯酚-硫酸法和高效凝胶渗透色谱法测得四种精多糖ASPW80-1、ASPW90-1、ASPB80-1和ASPA80-1的糖含量分别为97.70％、96.55%、94.17%和95.36%，其分子量依次为2.29*105 Da、5.41*104 Da、3.89*105 Da和5.48*104 Da。
　　采用经典化学方法完全酸水解、部分酸水解、高碘酸氧化-Smith降解、甲基化分析等联合现代仪器分析技术FT-IR、1D和2D NMR、HPAEC-PAD、GC-MS、HPLC等对四种精多糖结构进行分析，推断其可能的一级重复结构。
　　ASPW80-1由(1→3)-α-L-Rha,(1→6)-α-D-Glc和(1→4,6)-β-D-Gal构成主链,三个支链是(1→)-α-L-Ara,(1→4)-β-D-Man和(1→6)-β-D-Gal,末端由(1→)-α-L-Ara构成。
　　ASPW90-1由(1→3)-β-L-Rha,(1→6)-α-D-Man,(1→3)-α-L-Ara和(1→3,6)-β-D-Glc构成主链,三个支链是(1→3)-α-L-Ara,(1→4)-α-D-Glc和(1→6)-β-D-Gal,末端由(1→)-α-L-Ara构成。
　　ASPB80-1由(1→6)-β-D-Gal,(1→3,6)-α-D-Man,(1→4)-β-D-Glc和(1→4,6)-β-D-Glc构成主链，三个支链是(1→4)-α-L-Rha,(1→2)-β-D-Gal和(1→6)-β-D-Gal,末端由(1→)-α-L-Ara和(1→)-α-D-Man构成。
　　ASPA80-1可能是由(1→6)-β-D-Gal，(1→3)-α-L-Ara和(1→3,4)-β-L-Ara构成主链,二个支链是(1→2)-α-L-Rha和(1→6)-α-D-Glc，末端由(1→)-α-L-Ara构成。
　　采用氯磺酸-吡啶法对精多糖ASPW80-1进行硫酸化修饰，经红外图谱鉴定硫酸化取得成功，硫酸基取代度为0.67，硫酸化多糖分子量是1.82*105 Da。采用扫描电子显微镜和原子力显微镜对硫酸化前后多糖进行微观形貌的分析。
　　通过初步研究番荔枝果肉多糖的体外抗氧化活性，结果表明番荔枝果肉多糖ASPW80-1、ASPW90-1、ASPB80-1和ASPA80-1对DPPH自由基和羟基自由基均表现出适中的清除能力，而硫酸化多糖ASPW80-M1的抗氧化活性明显优于其他多糖。
　　通过初步研究番荔枝果肉多糖的体外免疫调节活性，结果表明番荔枝果肉多糖ASPW80-1、ASPW90-1、ASPB80-1、ASPA80-1和ASPW80-M1均表现出较强的免疫调节活性，其中硫酸化多糖ASPW80-M1免疫调节活性明显优于其他多糖。

目录

声明

英文缩写词

第一章 绪论

1.1 番荔枝研究现状

1.2 多糖的研究进展

1.3立题依据及研究内容

第二章 番荔枝果肉多糖提取和分离纯化

2.1 材料与试剂

2.2 试验方法

2.3 试验结果与讨论

2.4 本章小结

第三章 番荔枝果肉多糖结构分析和分子修饰

3.1 试剂与仪器

3.2 试验方法

3.3 结果与讨论

3.4 本章小结

第四章 番荔枝果肉多糖体外活性初步研究

4.1 试剂与仪器

4.2 试验方法

4.3 结果与讨论

4.4 本章小结

第五章 总结与展望

5.1 总结

5.2 主要创新点

5.3 展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表和撰写的论文

致谢