糖尿病患者血管病变危险因素筛选与糖尿病胃轻瘫大鼠血管和代谢异常对胃动力的影响及药物干预

摘要

1.目的：1.探讨2型糖尿病患者血管病变危险因素，为糖尿病胃轻瘫大鼠血管病变机理研究提供依据。 2.观察胃血管病变和代谢紊乱(糖、脂和自由基)在糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠胃排空延迟中的作用及作用机制； 3.代谢紊乱和血液流变学异常对DGP大鼠血管病变的影响； 4.血管病变在DGP大鼠胃排空延迟中的作用与机制； 5.DGP大鼠血管病变在胃和胰岛组织结构与功能损伤中的作用； 6.DGP大鼠胰岛和病变特点，胃激素与神经递质分泌紊乱与胃动力单位损伤；7.血流干预药物止血敏与蚓激酶，及中药“糖胃康”对DGP大鼠胃动力影响的作用及作用机制 2.方法：2.1.临床实验2002年1月-2005年3月就诊病人。随机纳入符合纳入标准的T2DM患者146例，其中男性82例，女性64例；年龄32-70岁；糖尿病病程1-78月；无大血管病变者55例，有大血管病变者91例。观察测量并记录以下内容：(1)患者年龄(岁)、性别(0-女，1-男)；(2)病程(月)；(3)DM文化程度(1-初中和小学，2-高中与中专，3-大专，4-本科及本科以上学历)；(4)并发症(肾病、白内障或视网膜病变等眼病；(5)和神经病变，0-无，1-有)；(6)体力活动(0-轻度，1-重度)；(7)脑力强度(0-轻度，1-重度)；(8)业余锻练时间(1-＜30min/天，2-30-60min/天，3-＞60min/天)；(9)病史(DM家族史、高血压病史和肝病史，0-无，1-有)；(10)测身高、体重，计算体型系数=身高(cm)/体重(kg)；(11)测血压，记录收缩压和舒张压(mmHg)；(12)测胸前心脏及肢体导联心电图，观察各波段和间期有无异常(0-正常，1-异常)，同时记录平均心率(次/分钟)；(13)取颈动脉主干、肱动脉、髂动脉和股浅深动脉分叉近端10mm处，采用高分辨力彩色超声仪观察大血管病变，以四处大血管任意一处病变即为DMAP病人，四处大血管均无病变都为非DMAP病人(0无血管病变，1-有血管病变)。(14)清晨空腹抽血查空腹血糖(mmol/L)、糖化血红蛋白(％)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量(mmol/L)。采用二值变量Logistic向前条件逐步回归法分析DMAP危险因素。 2.2.动物实验取131只SD雄性大鼠，随机分为两组，其中正常组10只，造模组121只，所有动物禁食12h后，于次日清晨空腹状态下测血糖，剔除血糖过高或偏离正常值较大的动物，称重，一次性腹腔注射0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液链脲佐菌素(STZ)60mg/kg造模，正常对照组大鼠单次腹腔注射等容量的0.1mol/L(pH4.5)柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。大鼠造模后，给予自由饮食。至造模后第7天，所有实验大鼠在禁食12h后剪尾采血测血糖值，以血糖≥16.7mmol/L为造模成功。将造模成功的大鼠按计算机随机数字表随机分为模型组、止血敏组(20只左右)、蚓激酶组(30只左右)和糖胃康(30只左右)组。造模成功后第3天起，糖胃康组大鼠予糖胃康(由党参10g、炒白术10g、茯苓12g、炙甘草6g、神曲10g、法半夏12g、柴胡8g、枳实10g、丹参12g、川芎10g等组成)水煎剂灌胃；止血敏组大鼠予止血敏灌胃；蚓激酶组大鼠予蚓激酶腹腔注射；模型组和正常组大鼠予等量蒸馏水灌胃，以上三组均每周组药6次，周日不给药。所给药物剂量相当于成人临床常用剂量2倍。每天观察并记录动物一般状态(包括饮食、排泄、分泌物、毛发、精神状态、自主运动、眼白内障等、死亡等的变化)。每三周称体重一次，按新体重重新计算给三药的给药药量。于造模后第7天、第17周和第30周分别测空腹血糖一次。于大鼠DM造模后第30周，按以下步骤进行实验：所有大鼠禁食20h后，各鼠均给予5ml酚红标准溶液(1mg/ml)灌胃，30分钟后乙醚麻醉。开胸心脏取血，每组随机选约一半大鼠，取2ml血，加肝素抗凝，另取适量血液不中抗凝剂，血液凝固后分离血清，血清不少于1.5ml，-20℃冰箱保存备用，放射免疫法测血清胰岛素和C肽，酶法测血脂四项(TC、TG、LDL、HDL)，血清SOD活性、MDA含量，循环内皮细计数(CEC)；各组剩余大鼠心脏取血4ml，柠檬酸钠抗凝，37℃条件下测定血液流变学各项指标：全血粘度，血浆粘度，全血还原粘度，红细胞沉降率，红细胞压积，纤维蛋白原。文氏管法测红细胞压积压)、Wintrobe管法测血沉，硫酸铵比浊法(双缩脲法标定)测纤维蛋白原。全血粘度采用切变率分别为高切150s-1、中切60s-1、低切10s-1。处死大鼠，迅速剖腹，结扎胃贲门和幽门，取出全胃，收集胃内残留物。722分光光度计以560nm波长下读取光密度值，计算大鼠胃排空率。取胃窦组织全层三块，分别用中性甲醛、4％多聚甲醛、戊二醛固定液中固定，取连续切片，观察以下内容：①行HE、Mallory、Masson和甲苯胺蓝染色，分别观察胃壁全层、胃血管和肌肉纤维样变、肌间丛神经元细胞病变及肌间丛活体神经元细胞内尼氏体病变；②行TNF-α、IL-1β、CD34、SP、VIP、5-HT、nNOS、C-kit、TUNEL、Bcl-2、Fas免疫组化染色，分别观察炎性因子表达、胃微血管、肌间丛胃激素与神经递质、ICC病变、肌细胞凋亡与凋亡基因表达；⑨戊二醛固定标本常规方法制作透射电镜切片，观察胃肌间丛组织超微变化。取胰腺胰尾部组织，行HE和醛品红-亮绿橙G染色，观察胰岛组织病变。 3.结论4.1.临床实验研究DMAP为多致病因子作用结果，所调查的因素中病程、.年龄、DM眼病、DM族史、体型系数、高血压与高血压病史、高血糖、微量白蛋白尿、高血脂为超声法检测到的T2DM患者颈动脉主干、肱动脉、髂动脉和股动脉病变的危险因素，日平均锻练时间、.教育水平为DMAP的保护因素，性别、体力活动强度、脑力强度、DM神经病变、DM肾病、舒张压、糖化血红蛋白、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白)未纳入DMAP危险因素。 4.2.动物实验研究(1)一次性腹腔注射60mg/kg的STZ复制DM大鼠于造模后30周均可出现明显的胃酚红排空延迟，胃肠激素紊乱与胃动力单位(UGM)损伤，均提示DGP模型已成功复制；(2).GDP大鼠存在明显的糖、脂、和自由基代谢紊乱，可能是DGP大鼠胃微血管病变的启起因素；(3)DGP大鼠存在明显的血液充变学障碍，可导致组织包括血管的缺血缺氧性损伤，可能参与DGP大鼠胃微血管病变；(4)炎性因子TNF-α表达增加，可能也参与胃微血管炎性损伤；(5)GDP大鼠胃粘膜下中小血管基底膜增厚、血管平滑肌纤维化；胃微血管分布密度减少、狭窄、微血栓形成及VEC超微结构损伤，参与胃UGM损伤；(6)GDP大鼠胃组织SP和5-HT表达显著减少，VIP表达显著增强，5-HT也有表达减少趋势，四种物质分泌紊乱可能是胃动力障碍的体液及神经因素；(7)胃组织内肌间神经丛内神经元细胞尤其是活性神经元细胞减少、空泡样变，可能是DGP大鼠胃动力障碍的神经因素；(8)ICC数量减少、空泡样变、细胞器损伤，可能是DGP大鼠胃动力障碍的重要病理基础；(9)平滑肌尤其是纵形肌萎缩、断裂、缺失、凋亡、排列紊乱、胶原纤维化，肌细胞空泡样变、溶解，线粒体肿胀，可能是DGP大鼠胃胃动力障碍的肌性因素。 (10)止血敏可能通过增加血液粘度，加重胰岛损害，导致糖、脂、自由基代谢紊乱，诱发和加剧胃血管病变，减少胃血流，参与胃GHs和神经递质分泌紊乱和UGM损害；(11)蚓激酶可能通过降低血液黏度，改善胰岛和胃组织缺氧，减轻胰岛损伤，抑制胃血管、GHs与神经递质分泌紊乱和UGM结构缺血缺氧性损伤。(12)中药可能通过改善STZ诱导胰岛损伤、降糖、降脂、减少自由基，改善血液流变学，防治胃血管损伤，纠正胃GHs和神经递质合成与分泌紊乱，保护胃神经元细胞、ICC和平滑肌损伤，改善胃运动功能。

目录

文摘

英文文摘

前言

广州中医药大学学位论文原创性声明及关于学位论文使用授权的声明

第二部分文献研究

第三部分临床实验研究

第四部分动物实验研究

第五部分讨论

第六部分小结

第七部分附 图

第八部分参考文献

附节略词表

附 糖尿病患者血管病变危险因素分析调查表（节选）

致谢