慢性肾脏病3-5期患者脾肾气虚证与脾肾阳虚证的代谢组学研究

摘要

目的:
　　利用代谢组学的技术和系统生物学的方法，全谱分析慢性肾脏病3-5期患者血液标本的代谢组学指纹图谱，比较慢性肾脏病3-5期脾肾气虚证、脾肾阳虚证2种证型的患者的血液代谢组学的差异，探寻中医证型潜在的生物标志物（群）和中医证候的内在物质基础。
　　方法:
　　本研究共纳入90例受试者，其中慢性肾脏病3-5期非透析患者60例，其中脾肾气虚组患者30例，脾肾阳虚组患者30例;纳入健康对照组共30例，健康对照组受试者来自广东省中医院体检中心。
　　留取纳入人群全血及24小时尿液，用于实验室检查，血液于高速离心后取上层血清冻存。在代谢组学检测前，对标本进行冻融及相应预处理。利用Waters UPLC高效液相色谱仪全谱分析受试者的血清代谢组学信息，用Analyt软件搜集代谢组学信息，得出代谢组学指纹图谱。用markerview软件对代谢指纹图谱进行预处理，再将数据导入SIMCA-P11.5软进行PCA、PLS-DA分析，得出VIP(Variable ImportanceProjection)值，根据VIP值对检测出的化合物进行筛选，寻找潜在生物标志物。最后在网络数据库寻找匹对的化合物，确定潜在生物标志物（群）。
　　结果:
　　慢性肾脏病患者脾肾阳虚证及脾肾气虚证患者在24小时尿蛋白定量、肾功、肝功、血脂及空腹血糖等传统实验室检查结果的差异并无统计学意义。慢性肾脏病脾肾阳虚证、脾肾气虚证潜在的生物标志物（群）为:十八烷酸、辛酰基胆碱、9-癸烯酰胆碱、4羟双氢神经鞘氨醇、二十六醇肉碱、12，13-朵酸、十四烷醇、γ-谷氨酰基-左旋-丁二胺、N-烟酰甘氨酸、聚酰亚胺左旋肉碱、3，4-二羟苯甘氨酸、神经酰胺(d18∶1/20∶0)、萜烯基酸异戊酯、十八烯酸、岩芹酸。
　　结论:
　　1.传统的实验室指标，如24小时尿蛋白、肝肾功能、血脂、血糖等，无法帮助医生区分慢性肾脏病3-5期脾肾气虚证与脾肾阳虚证患者。
　　2.利用代谢组学技术能很好的区慢性肾脏病脾肾气虚证患者及脾肾阳虚证患者之间血清代谢组学差异，证明代谢组学能满足未来中医证候研究的需求。
　　3.代谢组学分析表明，慢性肾脏病脾肾气虚证及脾肾阳虚证的代谢差异主要存在于氨基酸、脂肪酸、鞘脂类等化合物中，其主要涉及脂肪酸代谢、氨基酸代谢、鞘脂类代谢及亚油酸代谢。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 现代医学研究进展

一、慢性肾脏病的流行病学

二、慢性肾脏病的发病机制

三、治疗

第二节 中医对慢性肾脏病的认识及研究进展

一、祖国医学对慢性肾脏病病名的探讨

二、慢性肾衰的中医病因病机

第三节 辨证论治

一、扶正为主

二、祛邪为主

三、扶正祛邪并重

第四节 代谢组学研究进展

一、代谢组学定义及概述

二、代谢组学在肾脏病中的应用

三、代谢组学在肾脏病中医证据候学的应用

第二章 临床研究

第一节 研究目的

第二节 研究设计原则

第三节 研究对象

一、对照组

二、研究组

三、西医诊断标准

四、中医辨证诊断标准

五、纳入标准

六、排除标准

第四节 研究内容

一、信息采集

二、实验室检查

三、数据分析与统计学方法

第五节 结果

一、一般资料

二、实验室指标

第六节 分析与讨论

一、中医证型与常规实验室指标

二、不足与展望

第三章 代谢组学研究

第一节 研究目的

第二节 研究对象

第三节 研究方法

一、仪器与试剂

二、样品的前期集中处理

三、液质联用检测条件

四、采集数据多元统计分析

五、典型指纹图谱

第四节 结果与分析

一、PCA与PLA-DA数据分析

二、潜在生物标志物的鉴定

三、潜在生物标志物在不同分组中的含量测定

四、潜在生物标志物活性与代谢途径分析

第五节、讨论

一、代谢组学与中医证候学

二、结合代谢组学辅助指导临床治疗

三、不足与展望

结语

第一节 结论

第二节 不足与展望

参考文献

致谢