蛹虫草培养基中多糖和虫草素的提取及纯化研究

摘要

课题研究了蛹虫草固体培养基中多糖的提取及纯化工艺,对比了培养基中多糖与子实体虫草多糖的结构和抗氧化性能。同时研究了蛹虫草固体培养基中虫草素的提取及分离工艺,优化了虫草素的HPLC分析方法。
　　 1、研究了用水浴法、超声波法和微波三种方法提取蛹虫草培养基中多糖的实验条件。水浴法、超声波法和微波法多糖提取率分别为81.21％、67.94％和89.64％。其中微波法多糖提取率较高,其工艺参数为:称取干粉样品,加15倍质量的水,于微波炉60W下提取1min,加20mL乙醇,0℃下放置24h,过滤得粗多糖。
　　 2、比较了蛹虫草子实体中虫草多糖与蛹虫草培养基多糖的结构和抗氧化性能。从红外谱图中发现两者结构相同,都具有糖类物质的特征吸收峰。培养基多糖对O2-·和[·OH]的清除率随多糖浓度的增大而增加,并且多糖除蛋白纯化后,抗氧化性能略有增加,与子实体多糖抗氧化性能相似。当培养基多糖浓度为1.0mg／mL时,纯化前对O2-·清除率为45.19％,对[·OH]清除率为22.62％,纯化后对O2-·清除率为49.06％,对[·OH]清除率为24.69％。
　　 3、研究了HPLC同时测定虫草素和腺苷的方法,采用Inertsil ODS-SP(150×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行色谱分离,流速1.0mL／min,柱温35℃,DAD二极管阵列检测器,检测波长260nm,进样量10μL。在2-10μg／mL浓度范围内,虫草素和腺苷线性关系良好,相关系数分别为0.9998和0.9992。虫草素和腺苷的回收率分别是63.30％-67.11％和63.97％-70.39％,相对标准偏差分别是0.56％-1.97％和0.94％-1.97％,检出限分别是0.19μg／mL和0.02μg／mL。
　　 4、用正交实验研究了培养基中虫草素的提取工艺。水浴法、超声波法、微波法和超临界法的提取率分别为58.20％、69.05％、85.65％和9.63％。其中微波法虫草素提取率较高,其工艺参数为:称取干粉样品,加10倍质量的水,于微波炉中40W下提取3min。
　　 5、研究了纯虫草素在732阳离子交换树脂、717阴离子交换树脂和硅胶上的吸附解析性能。在732阳离子交换柱上,用O.15mol／I.,氨水作洗脱剂,虫草素的洗脱率为91.14％；在717阴离子交换树脂上,用水作洗脱剂,虫草素的洗脱率为82.83％～在硅胶柱上,用氯仿:甲醇:石油醚(9:1:4)作洗脱剂,虫草素的洗脱率为89.35％。用732阳离子交换树脂纯化蛹虫草培养基虫草素提取液,纯化后的HPLC图杂质峰减少,虫草素保留率为88.10％。