微量富集及模糊衍生技术筛选抗结核新活性成分

摘要

目的：通过微量富集和模糊衍生方法初步建立抗结核新型药物筛选平台，并从已知抗结核药物中筛选新的活性成分。
　　方法：将异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）、链霉素（SM）、卡那霉素（KM）、阿米卡星（AMK）、氧氟沙星（Ofx）、左氧氟沙星（Lfx）、加替沙星（Gfx）、莫西沙星（Mfx）、对氨基水杨酸钠（PAS）和丙硫异烟胺（Pto）共12种抗结核药物进行模糊衍生，并对衍生后产生的新成分进行微量富集筛选抗结核新成分。将上述药品分别配制成0.5％的甲醇溶液，每种药品溶液以线条状上样在一张薄层板上，并在薄层板上进行模糊衍生。将衍生的混合物进行二维薄层色谱（2D-TLC）展开，在第一个维度将药品衍生物中的成分根据不同极性进行分离，形成条状谱带，然后将薄层板平行旋转90°进行二维展开，把条状谱带推至薄层板边缘并聚集为点状谱带，达到微量成分富集的作用。将点状谱带逐一分割，分别置于铺满结核分枝杆菌(MTB)的培养基上，37 ℃恒温培养箱培养4-8周，观察各谱带的抑菌作用。
　　结果：INH和EMB两组中存在相应谱带区域有抑制MTB生长的作用，其中INH组的抑菌实验的灵敏度和特异度较高，进一步分割INH（INH对照组）和INH I（INH衍生物组）的抑菌区域逐一谱带进行培养，从而得出INH I（4号谱带）具有显著抑制敏感结核分枝杆菌和耐药结核分枝杆菌生长的作用，INH I组中可能产生了新成分。
　　结论：建立了微量富集方法和模糊衍生技术筛选抗结核新药的平台，使数个实验室工作在同一张薄层板上进行，从而具有高效、低成本和省时省力等优点。本技术可把已知抗结核药物中的微量成分分离出来，通过体外抑菌实验，从已知的药物中发现抗结核新成分。在此平台基础上，初步从INH的衍生物中筛选出抗结核新成分，为药物的分离、筛选及新药的研发奠定了基础。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

2 结果

2.1 空白薄层板的抑菌实验

2.2 15种抗结核药薄层板的抑菌实验

2.3 INH和INH I的薄层板片段抑菌实验

2.4 INH和INH I的薄层板谱带抑菌实验

2.5 INH和INH I的薄层板耐药结核菌抑菌实验

2.6 INH和INH I抑菌谱带作用比较

3 讨论

4 结论

参考文献

综述:中药治疗耐药结核病的进展

参考文献

致谢

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