模糊衍生及微量富集技术对异烟肼潜在新活性成分的分离与鉴定

摘要

目的：通过模糊衍生技术、微量富集方法及高效液相色谱法分离、鉴定与纯化异烟肼（INH）潜在新活性成分。 方法：将具有抗结核作用的异烟肼（INH）配制成10%的INH甲醇溶液，以线样上样于薄层板后进行模糊衍生。衍生物混合物根据分配系数的不同进行一维展开与分离，产生不同颜色的谱带。然后将薄层板水平旋转90°进行二维展开，把一维展开的条状谱带聚集为点状谱带，达到微量成分富集的作用。本研究设置空白薄层板组、INH原样对照组、INH衍生物组，分别进行H37Rv结核菌抑菌试验。将试验谱带平铺于已接种H37Rv结核分枝杆菌（MTB）的改良培养基上，于37℃恒温培养箱中孵育，4周后筛选出无MTB生长的谱带，即找到对MTB具有抑制作用的活性谱带。最后通过高效液相色谱法对活性谱带进行成分分离与纯化，鉴定是否为潜在新成分。 结果：本研究通过模糊衍生及微量富集技术，分离得到12条INH衍生物谱带。INH衍生物抑菌试验显示空白薄层板谱带见MTB生长，INH原样谱带中未见MTB生长，异烟肼衍生物中的5号及6号谱带未见MTB生长，余谱带中见MTB生长。证实INH空白薄层板对本试验无干扰，INH原样有抗结核作用，而INH衍生物5号及6号谱带中含有抗结核活性成分。进一步采用高效液相色谱法对INH衍生物5号及6号谱带成分进行分析，证实其为与原有INH不同的潜在新成分。对INH衍生物5号进行纯化时，发现其不稳定、易分解，目前正在进行纯化方法的改进并拟行最终的结构鉴定。 结论：本研究通过模糊衍生技术、微量富集方法及高效液相色谱法分离、鉴定和纯化了INH潜在新活性成分，为进一步结构分析及成分鉴定奠定了基础。

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