Fis1和Mfn1表达及氧化应激在慢性氟中毒大鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤中的作用

摘要

目的:研究线粒体分裂蛋白1(Mitochondrialfissionprotein1,Fis1)和线粒体融合蛋白1(Mitochondrialfusinprotein1,Mfn1)表达及氧化应激在慢性氟中毒大鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤中的作用,探讨慢性氟中毒肾脏细胞线粒体损伤发病机制,为地方性氟中毒的防治提供理论依据。
　　方法:L60只SD(SpragueDawley)大鼠随机分为3组,每组20只,组内雌雄各半;对照组饮用自来水(含氟量低于0.5mg/L),低氟组、高氟组分别饮用加氟10mg/L、50mg/L的自来水。分别于3、6个月末经股动脉放血处死大鼠后取肾脏组织;采用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟;采用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学法检测肾脏组织Fis1和Mfn1表达;采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(Malondialdehyde,MDA),比色法测定总抗氧化能力(Totalantioxidantcapacity,T-AOC);光镜观察肾脏组织学结构,透射电镜观察肾小管上皮细胞线粒体超微结构;实验结果作统计学分析。
　　结果:(1)染氟组大鼠出现不同程度的氟斑牙,高氟组重于低氟组。(2)染氟组大鼠尿氟含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)染氟组大鼠肾脏组织Fis1在转录水平和蛋白水平表达高于对照组,而Mfn1在转录水平和蛋白水平表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)染氟组大鼠肾脏组织MDA水平高于对照组,而T-AOC水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)光镜下可见染氟组大鼠肾小管上皮细胞胞浆疏松淡染。(6)透射电镜下可见染氟组大鼠肾小管上皮细胞线粒体嵴模糊或者消失和线粒体肿胀,线粒体分裂截面出现。
　　结论:摄入过量的氟引起染氟组大鼠肾脏组织Fisl在转录水平和蛋白水平表达升高,Mfn1在转录水平和蛋白水平表达降低,促进线粒体分裂并抑制线粒体融合,导致融合分裂失衡和线粒体超微结构改变。Fis1和Mfn1表达与氧化应激之间存在相互影响的可能,该过程在慢性氟中毒大鼠肾小管上皮细胞线粒体损伤的发生机制中可能起重要作用。

目录

封面

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中文摘要

前 言

材料与方法

1. 材料

2. 检测指标及方法

结 果

3.1 大鼠氟斑牙发生情况和尿氟水平

3.2 大鼠肾脏组织Fis1和Mfn1 mRNA转录水平

3.3大鼠肾脏组织Fis1和Mfn1蛋白表达水平

3.4 大鼠肾脏组织氧化应激水平

3.5大鼠肾脏组织学结构

3.6大鼠肾小管上皮细胞线粒体超微结构

讨 论

一、慢性氟中毒大鼠模型的建立

二、慢性氟中毒大鼠肾脏组织Fis1和Mfn1表达情况

三、慢性氟中毒大鼠肾脏组织氧化应激水平情况

四、慢性氟中毒大鼠肾脏组织病理学表现

结论

创新点

参考文献

英文摘要

致谢

缩略词表

学位论文独创性声明

附：综述