氧化应激在镉所致大鼠肾小管上皮细胞自噬抑制中的作用

摘要

目的：本研究拟探讨氧化应激在镉所致大鼠肾小管上皮细胞自噬抑制中的作用. 方法：原代大鼠肾小管上皮细胞培养过程中进行镉与活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)的处理,免疫印迹法检测p62和LC3蛋白水平;分别采用RFP-GFP-LC3与GFP-LC3对细胞进行转染,共聚焦显微法检测自噬流以及自噬小体数量;并采用免疫荧光技术对LC3与LAMP-1及LC3与Rab7的共定位情况进行检测. 结果：NAC能显著抑制Cd所诱导胞内活性氧产生、p62与LC3蛋白水平的升高及自噬小体的蓄积;NAC显著恢复镉所诱导LC3与LAMP-1及LC3与Rab7的共定位程度的降低. 结论：镉染毒所致氧化应激抑制了肾小管上皮细胞自噬流而引起自噬体降解受阻,主要原因在于氧化应激干扰了Rab7对自噬体的运载功能而阻止自噬体与溶酶体的融合.