白及止血作用、作用机制及止血效价测定研究

摘要

目的：通过白及组分的止血作用及作用机制研究，探讨白及有效组分，并建立一种基于止血效价的生物活性测定方法。
　　方法:1.白及用95％乙醇回流提取浸膏，浸膏经不同浓度乙醇大孔树脂柱层析分离，分别获得 A、B、C、D组分，剩余药渣水煮、醇沉、Sevag法除蛋白，制备E组分；2.采用小鼠剪尾法对白及不同组分的止血作用及有效组分进行筛选；3.建立大鼠肺、胃出血（BHH syndrome）模型，考察白及止血有效组分对大鼠一般体征、血小板系统、纤溶系统、肺、胃组织病理学的影响，对白及止血作用机制进行研究；4.通过Apyrase酶、P2Y1受体抑制剂（MRS2179）、P2Y12受体抑制剂（2-MeSAMP）、PKC受体抑制剂（Ro-31-8220）和TXA2受体抑制剂（SQ29548）观察白及止血有效组分对大鼠体外血小板聚集、变形以及释放的作用特点和G蛋白偶联受体中ADP受体及TXA2信号通路的影响，探讨白及体外的止血作用机制；5.采用凝血酶时间（TT）的生物活性测定方法，对白及有效组分的止血效价进行评价。
　　结果：1. C、E组分均能显著缩短小鼠出血时间（P<0.001），其缩短率分别为36.3%、45.7%；2.与模型组比较C、E组分均能使血小板最大聚集率升高（P<0.05），t-PA与PAI-1的比值接近于1（P<0.05），改善肺、胃出血情况；3. Apyrase酶、MRS2179、2-MeSAMP和Ro-31-8220能够特异性的抑制E组分对血小板的诱导作用，SQ29548对血小板聚集无抑制作用；4.凝血酶时间（TT）的生物活性测定方法能通过可靠性检验（偏离直线 P>0.05、偏离平行 P>0.05），仪器精密度（RSD3.84%）、中间精密度（RSD4.57%）、重复性（RSD3.21%）、稳定性（RSD3.67%）良好，不同产地白及止血生物效价为821.93~1187.53 U·g-1。
　　结论：C、E组分为白及有效组分，白及有效组分能通过改善血小板系统、纤溶系统对肺、胃组织的出血发挥治疗作用，并主要通过对 G蛋白偶联受体信号转导途径中的ADP受体信号通路产生影响，刺激血小板激活，使其聚集、释放、变形而发挥止血作用,且可能与 TXA2信号通路下游分子有关；所建立的白及止血生物效价检测方法可靠，操作简便，重复性好，可用于白及止血生物效价的测定。

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英文缩略词表

0 引言

第一部分 有效组分的制备及筛选

1 仪器与材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

第二部分 有效组分体内止血作用及机制的研究

1 仪器与材料

2 方法

3 结果

4 结论

5 结论

第三部分 有效组分体外止血作用及机制的研究

1 仪器与材料

2 方法

3 结 果

4 讨论

5 结 论

第四部分 白及药材的止血效价测定

1 仪器与材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 结论

全文总结

参考文献

综述：白及的化学成分、药理作用、临床应用、质量控制研究进展

作者简历

致谢

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