索拉非尼联合他莫昔芬对胆管细胞癌生长的抑制及其机制

摘要

目的：研究索拉非尼联合他莫昔芬在体外对胆管细胞癌的抗瘤效果，探讨索拉非尼单用或与他莫昔芬联用时的抗瘤机制。
　　方法：在体外培养人胆管癌细胞株QBC939、SK-ChA-1及Mz-ChA-1，MTT法检测索拉非尼单用和与他莫昔芬联用时对胆管癌细胞株的生长抑制作用。实时荧光定量PCR检测索拉非尼对胆管癌细胞株QBC939内Bcl-2、Bcl-xL、cFLIPL、Mcl-1和p21等基因的mRNA水平的影响。Western blotting分析索拉非尼单用和与他莫昔芬联用时对细胞株凋亡的影响(PARP)，并分析相关信号通路蛋白Bcl-2、Akt、p-Akt、Bcl-xL、Erk、p-Erk、cFLIPS/L和Mcl-1表达水平的变化，同时还分析Mek抑制剂PD98059对细胞凋亡及相关信号通路蛋白的影响。
　　结果：索拉非尼单用能抑制胆管细胞癌的增殖，7.5μΜ的他莫昔芬和索拉非尼联用时能增强索拉非尼对胆管癌细胞株的生长抑制，两药之间存在协同作用，在细胞株SK-ChA-1，两药的协同作用最明显，在细胞株Mz-ChA-1，他莫昔芬仅和高浓度的索拉非尼联用时出现协同作用。索拉非尼处理24h使胆管癌细胞株QBC939内p21、cFLIPL和Mcl-1的mRNA水平明显上调。索拉非尼处理24h能诱导胆管癌细胞株QBC939和SK-ChA-1凋亡，但不诱导细胞株Mz-ChA-1凋亡。索拉非尼使胆管癌细胞株QBC939和SK-ChA-1内p-Erk、cFLIPL和Mcl-1的表达水平下调，但不下调细胞株Mz-ChA-1内p-Erk、cFLIPL和Mcl-1的表达水平。索拉非尼还下调胆管癌细胞株QBC939内Bcl-2的表达水平。索拉非尼对胆管癌细胞株SK-ChA-1内p-Akt的表达水平也有下调作用。PD98059能明显下调胆管癌细胞株QBC939内p-Erk的水平，但PD98059处理24h并不诱导细胞株QBC939凋亡，也不下调细胞内cFLIPL和Mcl-1的水平。7.5μΜ的他莫昔芬和索拉非尼联用时，能增强索拉非尼诱导的胆管癌细胞株SK-ChA-1的凋亡。他莫昔芬和索拉非尼联用促进了cFLIPL表达水平的进一步下调。
　　结论：索拉非尼通过Mek/Erk通路非依赖机制诱导胆管癌细胞凋亡，索拉非尼诱导细胞凋亡与下调抗凋亡蛋白cFLIPL和Mcl-1的表达水平有关。Bcl-2和p-Akt表达水平的下调可能也介导了索拉非尼诱导的细胞凋亡，但具有细胞特异性。索拉非尼联合他莫昔芬对胆管细胞癌具有协同抗增殖活性，他莫昔芬使索拉非尼诱导的细胞凋亡进一步增加，凋亡增加与cFLIPL的表达水平进一步下调有关。

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中英文缩略词表

第一章 前言

第二章 实验材料

1. 细胞株

2. 主要仪器及设备

3. 主要试剂

4. 主要溶液的配制

第三章 实验方法

1. 细胞培养

2. 细胞毒性实验（MTT法）

3. RNA相关实验及方法

4. 蛋白质相关实验及方法

5. 统计学方法

第四章 实验结果

1. 索拉非尼及他莫昔芬均能抑制胆管癌细胞株的生长

2. 索拉非尼和他莫昔芬联用在体外能产生协同抗瘤作用

3. 索拉非尼使胆管癌细胞株QBC939内p21、Mcl-1和cFLIPL的mRNA水平上调

4. 索拉非尼通过下调抗凋亡蛋白 cFLIPL和 Mcl-1 的表达水平诱导胆管癌细胞凋亡

5.索拉非尼和他莫昔芬联用的协同抗瘤机制

第五章 讨论

结论

参考文献

致谢

综述一 索拉非尼应用于胆管细胞癌治疗的研究进展

综述二 雌激素受体与胆管相关疾病的研究进展

硕士期间发表的文章