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芹菜素对人肺癌细胞株A549迁移和侵袭能力的抑制作用及机制

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前言

材料与方法

一、药物与试剂

二、主要仪器

三、细胞株

四、方法

1.细胞培养

2.药物配制

3 . C CK8实验

4.细胞迁移和侵袭实验:

5.酶联免疫吸附测定(enzyme-link ed immunosorbent ass ay ELISA)检测各组上清液中的MMP-2、VEGF分泌量:

6、W ester n印迹检测MMP-2、VEGF蛋白的表达:

五、统计学方法

结果

一、芹菜素抑制肺癌A549细胞的增殖

二、芹菜素抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力

三、芹菜素对肺癌A549细胞MMP-2、VEGF表达的影响

讨论

结论与展望

参考文献

致谢

[综述]

参考文献

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摘要

目的:探讨芹菜素(apigenin、AP)对肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响和机制。
  方法:采用含有不同浓度芹菜素的培养液对A549细胞培养24小时,利用CCK8法检测A549细胞的生存率。根据增殖抑制实验结果,选择适当的药物干预浓度下培养的细胞用于下一步实验,采用transwell迁移和侵袭试验检测芹菜素对肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响;酶联免疫吸附测定(ELISA)、western-blot分析芹菜素对细胞基质金属蛋白酶(MMP2)和血管内皮生长因子(VEGF)活性和蛋白表达的改变。
  结果:CCK8法检测显示一定浓度的芹菜素可抑制A549细胞增殖,并呈浓度依赖性(P<0.05);A549细胞在0-20μmol/L浓度下芹菜素作用24h后活力大于75%,抑制效应不明显(P>0.05),24h的半抑制浓度(IC50)为46.5±3.7μmol/L。选用20μmol/L(抑制细胞增殖不明显)和40μmol/L(显著抑制细胞增殖)作为迁移和侵袭实验的药物干预浓度。与对照组比较,经芹菜素处理后A549细胞迁移和侵袭能力明显降低,且40μmol/L芹菜素对细胞的侵袭抑制作用更加明显,相对应的MMP-2、VEGF蛋白表达和分泌减少。
  结论:芹菜素可有效抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与芹菜素降低细胞MMP-2、VEGF的蛋白表达和分泌相关。

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