人工栽培金线莲中多糖的分离纯化、结构表征和体外抗肿瘤作用及机制研究

摘要

本文采用水提醇沉法提取金线莲中的多糖，通过比较不同单糖和金线莲多糖（ARPS）的紫外吸收谱图来选择最合适的标准单糖，对不同产地和不同培养条件的金线莲中的多糖进行含量分析，高速逆流色谱法（HSCCC）分离纯化ARPS，优化了分离的两相溶剂体系，并对ARPS结构进行表征；MTT法考察人工栽培的金线莲中提取纯化的 ARPS对不同肿瘤细胞系作用的时效和量效关系，荧光分析法和流式细胞分析技术对ARPS抗肿瘤作用机制进行了初步探讨，为人工栽培的金线莲的进一步临床研究与应用提供理论依据和实验方法。
　　本研究主要内容包括：⑴对单糖标准品的选择进行系统研究，通过比较甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖与 ARPS经过苯酚-硫酸法反应后的紫外-可见吸收谱图，选择与ARPS吸收谱图最为相似的葡萄糖作为单糖标准品。用精制后的 ARPS求得换算因子f，对不同产地与不同培养条件的金线莲中多糖的含量进行分析，结果表明金线莲药材全草中多糖含量为2.01%～17.49%不等，不同产地和培养条件的差别对ARPS含量影响较大。⑵应用HSCCC分离纯化ARPS，通过比较PEG600、800、1000和不同比例的盐组成的双水相体系对 ARPS分配系数K值的影响，选择最合适的二相溶剂体系实现对ARPS的分离纯化，并测定精制后 ARPS的含量，结果表明12.5%PEG1000-20%磷酸盐体系最适用于分离纯化 ARPS，经过HSCCC纯化后，ARPS含量为95.01%，HSCCC能够很好地实现 ARPS的分离纯化。⑶通过对UV、HPGPC、HPLC、LC-MS、IR、NMR、AFM及刚果红实验等方法展开对ARPS的结构表征。结果表明ARPS平均分子量为26090 Da，由甘露糖、核糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，各单糖的摩尔比为：甘露糖：核糖：葡萄糖：半乳糖：阿拉伯糖=1.00：8.47：47.30：1.17：1.19，糖苷键为α构型，不存在三股螺旋构象，且AFM镜下观察显示其分子聚集紧密成团，类似球状，直径约为120~380nm。⑷通过MTT实验考察不同浓度人工栽培的金线莲中提取纯化的ARPS对肺癌A549、骨肉瘤143B、鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12、乳腺癌MCF-7、急性白血病HL60、慢性白血病K562、结肠癌SW620、食管癌OE19、肝癌HepG2、神经胶质瘤U251共10株细胞24 h和48 h的抑制作用，并用统计学方法加以分析，结果表明ARPS对OE19细胞48 h的作用结果最为显著，IC50值为5.67μmoL/L，荧光分析法和流式细胞分析技术对 ARPS抗肿瘤作用的机制进行初步探讨，结果表明 ARPS诱导OE19细胞凋亡并将其阻滞在G2/M期。

目录

声明

主要缩略词表

前言

1 不同产地及不同培养条件金线莲中多糖的含量分析研究

引言

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3 结果与讨论

1.4 小结

2 HSCCC分离纯化ARPS

引言

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.4 小结

3 ARPS的结构表征

引言

3.1 实验材料

3.2 实验方法

3.3 结果与讨论

3.4 小结

4 ARPS体外抗肿瘤作用及机制的初步研究

引言

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 结果与讨论

4.4 小结

总结与展望

参考文献

综述：植物多糖检测方法概述

在学期间发表论文和参加课题

致谢