应用ISSR和RAPD分子标记构建红麻遗传连锁图谱

摘要

构建红麻连锁遗传图谱有利于推动分子标记辅助育种在红麻生产上的应用,同时它也可以为基因的图位克隆奠定基础。本实验利用从埃及引进的的栽培种阿联红麻和本实验室自己育成的高产优质栽培种福红992进行杂交,构建了F2代遗传作图群体,通过ISSR、标准RAPD和双引物RAPD复合分子标记技术构建了一张红麻栽培品种之间的遗传连锁图谱,主要研究结果如下:
　　 (1)以阿联红麻和福红992杂交,F1自交获得162株F2代分离群体作为作图群体。
　　 (2)利用大肠杆菌工程菌提取TaqDNA聚合酶,并且论证了实验室自制的TaqDNA聚合酶扩增群体可行性。
　　 (3)进行了标准RAPD引物和双引物RAPD扩增的带型的分析,并且第一次创新性的运用RAPD双引物构建红麻遗传连锁图谱。
　　 (4)从42个ISSR引物、126个RAPD引物和随机组合的300个RAPD双引物组合中,以亲本阿联红麻和福红992为模板筛选出18个多态性较好的ISSR引物、24个RAPD引物和85个RAPD双引物组合。
　　 (5)利用筛选出的127个多态性引物对F2作图群体进行PCR扩增,共产生217条多态条带,平均每个引物可以扩增1.7个多态条带,最多的可以扩增6条多态性条带。
　　 (6)使用MAPMAKER/EXPVersion3.0b(MAPMAKER/EXP3.0)软件,初步构建了包括18个ISSR标记位点,25个RAPD标记位点和114个RAPD双引物标记位点的红麻遗传连锁图谱的框架图,在极其严谨的LOD值(LOD≥6.0maxdistance=26cM)下,最终有157个标记被划分为23个连锁群,其它60个标记暂时未被连入该图谱中。图谱总长2491.2cM,标记位点平均间距为15.8cM。最大标记间距为40.9cM,最小间距为0cM,每个连锁群上的标记数在2-17个之间,连锁群的长度在16.8-315.6cM之间。