应用SRAP和ISSR分子标记构建红麻的遗传连锁图谱

摘要

红麻(Hibiscus cannabinus)是麻纺和造纸的重要纤维植物，分子标记辅助育种及遗传连锁图谱构建研究滞后与其他主要作物。目前，红麻的遗传连锁图谱构建尚未见报道，分子标记遗传图谱的构建可以为红麻基因结构提供详细的描述，既是红麻遗传学研究的重要领域，又是红麻基因定位和克隆等应用研究的理论基础。为促进红麻基础科学研究的发展，本研究利用SRAP和IssR分子标记技术构建红麻的遗传连锁图谱，取得以下的研究成果。 (1) 以半野生种Ga42(源自加纳)和栽培种阿联红麻(源自埃及)杂交，F<,1>自交产生的203株F<,2>代分离群体作为作图群体。 (2) 从19X19对SRAP_h游与下游引物组合和30个ISSR引物中，以Ga42和阿联红麻为模板筛选出多态性较好的27对sRAP引物组合和5个ISSR引物。 (3) 利用sRAP和IssR两个分子标记筛选出了32个引物组合及引物，对F<,2>作图群体进行PCR扩增，共产生108个多态条带，平均每个引物组合产生3.4个多态条带，最多的可以产生8条。 (4) 使用Mapmaker/3.0，我们构建了包括68个sRAP标记位点和10个ISSR标记位点的红麻的连锁图谱，这些标记被分为16个连锁群(LOD≥30)，总长1423.9 cM，平均两个标记位点间距为18.25cM。每对标记组合可以产生10-50个大小在100-2000bp的清晰可辨的条带，其中70％的条带较亮。 (5) 这108个标记位点当中，有58个(54％)偏离3：1的分离比，偏分离十分严重。在我们的实验中，仅检测到2个共显性位点，和Li等报道的高共显性不太一致。红麻有18对染色体，而我们仅构建出16个连锁群，可能与我们目前所用的多态性引物还不够多有关，因此得到的多态性标记位点密度还不够高，导致有些连锁群位点不够均匀。

目录

声明

摘要

1前言

1.1红麻生产概况及其综合利用的研究进展

1.1.1红麻生产概况

1.1.2红麻的研究价值

1.1.3红麻的生态环保作用

1.1.4红麻的饲用价值

1.1.5红麻种子中不饱和脂肪酸等物质的医疗保健功能

1.1.6红麻全杆抄制纸浆的研发

1.1.7红麻纤维高档纺织品的开发

1.1.8红麻纤维的工业与建材利用

1.2红麻种质资源研究进展

1.2.1红麻种质资源的收集与保存

1.2.2红麻种质资源的形态与细胞学分类研究

1.2.3红麻特异种质的鉴定、发掘、及雄性不育材料的创新与利用研究

1.2.4红麻种质资源的分子标记及亲缘关系研究

1.2.5红麻特异种质创新与抗虫、抗除草剂转基因研究

1.2.6红麻种质遗传改良优异材料的创新

1.2.7国外红麻种质资源研究进展

1.3遗传标记及其应用

1.3.1 SRAP

1.3.2 SRAP与其它分子标记的比较

1.4分子遗传连锁图谱的构建及研究进展

1.4.1理论基础

1.4.2作图群体的建立

1.4.3遗传连锁图谱的研究进展

1.4.4构建DNA分子遗传图谱的应用研究

2材料与方法

2.1材料

2.1.1植物材料

2.1.2实验所用引物

2.2方法

2.2.1遗传作图亲本及F2群体的建立

2.2.2.技术路线

2.2.3红麻基因组DNA的提取

2.2.4反应程序

2.2.5反应体系

2.2.6电泳检测

2.3数据统计与分析

3结果与分析

3.1红麻基因组DNA提取技术及SRAP反应体系优化

3.1.1红麻基因组DNA提取与纯化

3.1.2 SRAP反应体系的优化

3.2引物组合筛选

3.3遗传作图数据处理与统计分析

3.4红麻SRAP分子标记连锁图的构建

4讨论

参考文献

附录

致谢