食用菌厉眼蕈蚊生防菌苏云金杆菌的筛选及毒力测定

摘要

厉眼蕈蚊是我国食用菌栽培中的一种重要的双翅目害虫,该类害虫除以幼虫取食多种食用菌和药用菌外,成虫还能传播病害和害螨。在化学防治的弊端日益突显、物理防治还无法有效控制幼虫危害的情况下,生物防治作为一种安全、有效的防治方法,愈来愈成为食用菌害虫防治方法研究的热点。本文研究的目的在于筛选出对食用菌厉眼蕈蚊有效的Bt菌株,确定其主要的杀虫活性成分以及对食用菌的安全性,为将来应用Bt实施食用菌害虫的无害化防治提供科学依据。主要研究结果如下:
　　 1.BRC-LLP29和IPS82两个菌株为初筛有效菌株,处理48 h校正死亡率分别达到了87.93％和70.21％。复筛得出处理96 h,BRC—LLP29菌株对厉眼蕈蚊的LC50为1.182×108cfu／mL,IPS82为1.977×108cfu／mL,说明前者对厉眼蕈蚊的活性高于后者。感染Bt的厉眼蕈蚊幼虫食欲减退,对毛笔触动反应迟钝,有腹泻现象,死亡后虫体变暗,轻触易破。
　　 2.BRC-LLP29菌株不同组分杀虫活性不同,低剂量的晶体蛋白(0.02648mg／mL)对食用菌厉眼蕈蚊具有很高的杀虫毒力,处理后24 h幼虫死亡率达90％,48 h为100％；孢晶混合物也表现出较高的杀虫活性,处理后48 h幼虫死亡率为75％,但是杀虫所需浓度远远高于晶体蛋白；而纯芽孢分离物即使在高浓度下亦几乎无杀虫活性,以26.48 mg／mL的浓度处理后48 h幼虫死亡率仅为8.33％。这说明,BRC-LLP29菌株产生的伴孢晶体蛋白是主要杀虫因子,而芽孢只起辅助杀虫作用。BRC-LLP29晶体蛋白对厉眼蕈蚊7～8日龄幼虫的LC50为0.004 mg／mL。
　　 3.BRC-LLP29发酵液对实验中的8种食用菌菌丝的生长均有不同程度的抑制,抑制作用大小(EC50)依次为香菇(1.175×105)>双孢菇(4.467×105)>茶树菇(1.148×106)>毛木耳(1.318×106)>金针菇(2.512×106)>秀珍菇(3.802x106)>平菇(9.772×106)>杏鲍菇(1.000×107)。
　　 4.Bt代谢产物20倍和40倍稀释液在0.05水平上能够显著抑制平菇、双孢菇、香菇、杏鲍菇和金针菇菌丝的生长；Bt代谢产物对双孢菇的抑制作用最明显,稀释320倍后对双孢菇仍有轻微的抑制作用,抑制率为1.83％。相反,Bt代谢产物在稀释320倍的情况下能够显著,促进茶树菇和秀珍菇菌丝的生长,而Bt代谢产物20倍稀释液和40倍稀释液处理的毛木耳菌丝的生长速率分别为3.91和3.71 mm／d,显著高于对照。
　　 综合上述结果,BRC-LLP29菌株发酵液在高浓度下对厉眼蕈蚊幼虫能够起到较好的控制作用,但其作用缓慢,杀虫速度远远比不上吡虫啉、阿维菌素等化学杀虫剂；而且BRC-LLP29菌株发酵液对食用菌菌丝的生长有明显的抑制作用。因此,菇房应用Bt开展食用菌厉眼蕈蚊的无害化防治当需进一步加强应用技术研究。

目录

文摘

英文文摘

第一章 前言

1 眼蕈蚊生物学习性及危害

2 眼蕈蚊防治现状

2.1 农业防治

2.2 物理防治

2.3 化学防治

2.4 生物防治

2.5 综合防治

3 Bt研究进展

3.1 Bt杀蚊活性研究

3.2 作用机制研究

3.3 抗性研究

4 Bt生防展望

4.1 与其他杀虫剂混配

4.2 与其他生防因子协同应用

4.3 其他技术的应用

4.4 增效物质的研究

4.5 Bt营养期杀虫蛋白研究

5 本研究的目的意义

第二章 菌株筛选

1 Bt菌株的初步筛选

1.1 Bt菌株和培养基

1.2 供试虫源

1.3 菌株发酵液制备

1.4 供试Bt菌株胃毒活性测定

2 菌株复筛

2.1 发酵液原液浓度

2.2 复筛方法

3 实验结果

3.1 初筛结果

3.2 复筛结果

4 讨论

第三章 BRC-LLP29菌株不同组分活性测定

1 纯芽孢分离物、孢晶混合物的制备及晶体蛋白的提取

1.1 仪器与试剂

1.2 Bt各组分制备

2 生物测定方法

3 结果与分析

4 小结与讨论

第四章 BRC-LLP29菌株对食用菌菌丝生长的影响

1 BRC-LLP29对食用菌菌丝生长的影响

1.1 材料与方法

1.2 结果与分析

2 BRC-LLP29菌株代谢产物对食用菌菌丝生长的影响

2.1 实验仪器及试剂

2.2 培养基

2.3 BRC-LLP29发酵液制备及供试食用菌菌株培养

2.4 代谢产物制备及实验方法

2.5 实验结果

3 小结与讨论

第五章 总结与展望

1 厉眼蕈蚊有效Bt菌株的筛选

2 高活性Bt菌株不同组分杀虫活性测定

3 Bt菌株对食用菌菌丝生长的影响

4 展望

参考文献

附录1 厉眼蕈蚊死亡状态图片

附录2 食用菌照片

致谢