携rtPA靶向血栓多功能MR分子探针的构建及表征

摘要

目的:制备携带溶栓药物重组组织型纤溶酶原激活剂(Recombinanttissue plasminogen activator, rtPA)的靶向血栓MR分子探针，并对其一般理化性能、体内外靶向血栓能力、溶栓能力及MR显影能力进行验证。
　　方法:采用碳二亚胺法将环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段(Cyclicarginine-glycine-aspartic，cRGD)连接于壳聚糖(Chitosan，CS)膜表面，得到CS-cRGD膜;双乳化溶剂挥发法（水/油/水法[W/O/W]）制备携带rtPA及载Fe3O4的聚乳酸羟基乙酸(Poly[lactic-co-glycolic acid]，PLGA)纳米粒，通过制备条件的调整，分别得到Fe3O4-PLGA、Fe3O4-PLGA-rtPA、Fe3O4-PLGA-rtPA/CS及Fe3O4-PLGA-rtPA/C S-cRGD纳米粒。用光学显微镜、透射电镜及激光粒度仪检测纳米粒的形态、分散性、结构、粒径、粒径分布及Zeta电位，激光共聚焦显微镜及流式细胞仪验证CS-cRGD膜对纳米粒表面的被覆，Fe3O4携带率及rtPA包封率分别用原子吸收光谱法及比色法测得，rtPA的体外释放活性用生色底物法检测。经体外靶向血栓病理切片及靶向溶栓实验证实纳米粒对体外血栓的靶向溶解能力后，分别用1.5 T及3.0 TMR扫描仪验证纳米粒的弛豫性能及对体内外血栓的靶向溶解显影能力。
　　结果:各组纳米粒均成功制得，形态规则，表面光滑呈球形，分散性好，粒径较均一，透射电镜可见Fe3O4颗粒均匀镶嵌于纳米粒壳上，Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒的平均粒径为395.2±12.2 nm，粒径分布（多分散系数[polydispersity index，PDI]）为0.163±0.024，Zeta电位为29.0±1.5 mV。激光共聚焦显微镜显示Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒可见环状绿色荧光，即异硫氰酸荧光素(Fluoresceinisothiocyanate，FITC)标记的cRGD成功被覆于纳米粒表面，流式细胞仪测得cRGD携带率为84.27％。Fe3O4携带率及rtPA包封率分别为49.3±3.4％，63.7±1.5％，体外释放实验显示Fe3O4-PLGA-rtPA/CS及Fe3 O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒中释放的rtPA的酶活性明显高于Fe3O4-PLGA-rtPA纳米粒。体外靶向血栓病理切片可见大量Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒聚集于血栓周边，体外靶向溶栓实验示Fe3O4-PLGA-rtPA、Fe3O4-PLGA-rtPA/CS和Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD组溶栓率在60分钟时分别为游离rtPA溶液的1.98、2.41、3.05倍。在MRI扫描中各组载Fe3O4的纳米粒均可显著降低T2*信号，与纯Fe3O4溶液相比，其横向弛豫率（Transverse relaxation rate，R2*）及信噪比(Signal-to-noise ratio，SNR)无显著差异。3.0 T MR扫描仪示Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒对体内外血栓均有靶向显影能力。
　　结论:Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD纳米粒形态规则，粒径适宜，带正电荷，Fe3O4携带率及rtPA包封率较高，可较好的保留rtPA的酶活性;对体内外血栓具有良好的靶向性，并能显著增强rtPA的溶栓性能;具备良好的MR对比增强效应，有望在MR监测下实现对血栓的早期诊断及治疗。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 纳米粒的构建

1．3 纳米粒性能检测

1．4 统计分析

2 结果

2．1 纳米粒一般理化性质

2．2 体外靶向溶栓实验

2．3 体内外MR扫描

3 讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述 载药系统靶向溶栓的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文