携RGDS脂膜氟烷微泡对血栓的靶向作用研究

摘要

目的：采用共价键合的方法制备携RGDS的脂膜氟烷微泡,探讨对血栓的靶向效果及助溶作用。rn 研究内容与方法：(1)携RGDS脂膜氟烷微泡的制备及鉴定,主要制备材料:标记有荧光异硫氰酸荧光素短肽片段RGDS,磷脂DSPC、 DPPG,氨基聚乙二醇(PEG-AT),激活剂碳化二亚胺盐酸盐,全氟丙烷气体(C3F8)。分别采用共价键合的方法和表面粘附法制备携RGDS的脂膜氟烷微泡;用荧光显微镜、流式细胞仪对靶向微泡进行鉴定;对体外血栓寻靶能力进行研究。(2)携RGDS的脂膜氟烷微泡对体外血栓的助溶作用采集正常人静脉血放于试管中,不加任何抗凝剂,静置2h后,得到一个全血细胞凝块(即红色血栓)。相同方法共得到血栓60块(每块1ml静脉血),平均重量为(0.37±0.07)g。将血块随机分为A、B、C三组:A组加入共价键合制备的靶向微泡;B组加入非靶向微泡;C组加入生理盐水。采用超声治疗仪,功率1.2W/cm<'2>,距离3cm,辐照15min后称重,电镜扫描经溶栓后的血块表面结构。rn 结果：荧光显微镜观察共价键合的靶向脂膜微泡外壳发出明亮的黄绿色荧光,而非靶向脂膜微泡在荧光显微镜下不可见。流式细胞仪检测采用共价键合方法制得的微泡其外壳波长较普通微泡发生改变,随机计数50,000个微泡,有82.96％的微泡不同于非靶向微泡,说明微泡达到82.96％的RGDS短肽片段结合率,采用表面粘附法制备的靶向超声造影剂结合率只有23％,清洗后降低至0.22％。激光共聚焦显微镜观察滴加于血块表面的共价键合制得的靶向微泡在激光共聚焦显微镜600倍下观察,可见大量荧光物质显像于血块图像上,分布于血块表面及纤维分隔内,相同观察条件下滴加了表面粘附法制备得到清洗后的靶向微泡的血块,不能观察到荧光物质。溶栓前后血块重量差均数比较,使用超声造影剂助溶的靶向组,血块重量改变最为明显,并呈直线下降,组间差异的显著性用t检验,P<0.01,有显著性意义。电镜扫描经溶栓后的血块,生理盐水组血凝块经消融后表面结构无明显改变,靶向微泡组可见大量均匀分布的空洞和裂隙,普通超声造影剂组仅见少量分布的小型凹陷及微小裂隙。rn 结论：共价键合的化学修饰方法与表面粘附法制备的RGDS脂膜氟烷微泡比较,具有更高的短肽片断携带率、更好的稳定性和血栓靶向性;使用流式细胞仪对于定量检测靶向微泡是一种有效的方法;共价键合的携RGDS的脂膜氟烷微泡能大量黏附血栓上,明显提高超声图像的信噪比,特别是血栓内部的回声显著增强,有利于对血栓的诊断;超声造影剂能增强超声波对血栓的助溶作用,靶向超声造影剂较非靶向超声造影剂具有更好的助溶效果。