1,25(OH)2VD3在LPS/D-GalN诱导小鼠急性肝衰竭中的作用及相关机制研究

摘要

背景及目的：急性肝衰竭（ALF）是临床上常见的严重肝病症候群,病死率极高。1,25-(OH)2VD3已被多次报道能延缓某些免疫相关疾病的进展，改善预后，但其在肝衰竭中的报道甚少。我们此次的研究目的是为了探讨1,25-(OH)2VD3在急性肝衰竭发生发展中的作用及其可能的作用机制。
　　方法：我们引入了通过注射脂多糖/半乳糖（LPS/D-GalN）诱导C57BL/6小鼠急性肝衰竭的模型，并在此模型基础上预先给予注射1,25-(OH)2VD3或其溶剂后观察小鼠急性肝衰竭的演变，通过观察组间血清中转氨酶水平、炎性细胞因子水平、肝脏组织病理改变以及小鼠的生存时间来进行效果评定。用氯化钆(GdCl3)清除小鼠体内巨噬细胞观察小鼠损伤情况。提取小鼠腹腔巨噬细胞检测Toll样受体4(TLR4)的表达及完成体外共培养实验。使用相应试剂盒及流式技术来检测对应指标。
　　结果：我们的实验结果发现，较模型溶剂对照组相比，相同时间点模型干预组测得的血清中丙氨酸转氨酶（ALT）水平及炎性细胞因子水平明显降低，肝脏病理损害减轻，生存时间有所延长，而非模型干预组和非模型溶剂对照组两组正常且无明显差异。清除掉小鼠巨噬细胞后肝衰竭的模型则不能很好的诱导，进一步研究发现相同时间点在没有LPS/D-GalN刺激的情况下干预组提取的小鼠腹腔巨噬细胞表面Toll样受体4（TLR4）的表达量与溶剂对照组无明显差异,而给予LPS/D-GalN刺激后较溶剂对照组比较，干预组TLR4的表达量明显降低。同样，体外LPS刺激小鼠巨噬细胞后1,25-(OH)2VD3干预组巨噬细胞表面TLR4的表达量低于溶剂对照组，且上清中分泌的炎性细胞因子水平也相应降低。
　　结论：上述结果表明，1,25-(OH)2VD3对LPS/D-GalN诱导的小鼠急性肝衰竭有一定的保护作用，且可能部分通过抑制LPS刺激后的巨噬细胞表面TLR4的表达进而削弱后续炎症通路来实现的。1,25-(OH)2VD3在小鼠急性肝衰竭中的保护作用为维生素D及其衍生物用于临床肝衰竭的辅助治疗提供了一定的参考。

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英汉缩略语名词对照

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前言

1材料方法

1.1材料

1.1.1实验动物

1.1.2巨噬细胞

1.1.3主要试剂

1.1.4主要溶液的配置

1.1.5主要仪器

1.2方法

1.2.1动物模型的建立

1.2.2 血清细胞因子的测定

1.2.3 转氨酶的测定

1.2.4 肝脏组织HE染色

1.2.5 巨噬细胞的消除

1.2.6 肝脏单个核细胞(MNC)的提取

1.2.7 腹腔巨噬细胞的提取

1.2.8 巨噬细胞的体外培养实验

1.2.9 流式标本的制备与检测

1.2.10 统计学分析

2结果

2.1 1,25-(OH)2VD3 在LPS/D-GalN诱导小鼠急性肝衰竭中的作用

2.2 巨噬细胞在小鼠肝衰竭模型中的作用

2.3 1,25-(OH)2VD3在体内对巨噬细胞表面TLR4表达的影响

2.4 1,25-(OH)2VD3在体外对巨噬细胞TLR4依赖性炎症通路的影响

3讨论

全文总结

参考文献

文献综述: 维生素D在免疫调节及相关疾病发生发展中的研究进展

致谢

硕士期间发表论文