内质网应激在D-GalN/LPS诱导小鼠急性肝衰竭损伤中的作用

摘要

目的:研究内质网应激在D-氨基半乳糖/脂多糖联合注射诱导小鼠重型肝炎肝衰竭致病机制中的作用.方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-氨基半乳糖/脂多糖建立小鼠重型肝炎肝衰竭模型.动物实验分组:对照组,重型肝炎肝衰竭模型组,4-丁酸苯酯(4-PBA)干预组(建模前6小时腹腔注射).免疫印迹方法检测肝脏组织内质网应激标志物蛋白表达水平,检测血清转氨酶ALT、AST评价肝脏功能,观察肝脏组织病理变化评价肝脏损伤情况,实时荧光定量PCR法检测肝脏细胞炎症因子基因表达,TENNL方法检测肝脏肝细胞凋亡情况.多组样本均数的两两比较采用One-way ANOVA分析(方差齐者用LSD-t检验，方差不齐者用Games-Howell法)，.P<0.05有统计学意义。结果:免疫印迹方法结果显示，内质网应激蛋白标志物GRP78和随着急性肝衰竭的进展表达逐渐升高;非折叠蛋白反应在急性肝衰竭早期被激活，而内质网应激诱导的凋亡蛋白CHOP和Caspase-12在急性肝衰竭晚期表达升高。4-PBA抑制内质网应激可显著改善肝脏功能(血清ALT, AST水平明显下降，肝组织病理损伤明显改善)，并且抑制炎症反应(抑制促炎因子TNF-α、IL-6, IL-1β表达);TNNEL和免疫印迹方法研究结果表明，4-PBA干预内质网应激显著抑制肝细胞凋亡并降低了凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3表达。结论:内质网应激在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭过程中承担着关键作用抑制内质网应激通过降低炎症反应和肝细胞凋亡从而改善肝损伤。因此，对内质网应激进行干预有可能为重型肝炎肝衰竭的治疗提供一个新的靶点。