GRASP65在JNK信号通路调节胃癌细胞增殖、凋亡及周期中的作用及其机制的初步研究

摘要

目的： 探索GRASP65（Golgi reassembly stacking protein65）在JNK信号通路调节人胃癌细胞的增殖、凋亡及周期中的作用和机制。 方法： 首先，将高表达 GRASP65的胃癌细胞株 SGC7901用三条siRNA特异片段应用转染试剂进行瞬时转染，减少此胃癌细胞中GRASP65蛋白的表达量。然后，RT-qPCR及Western blot用于观察下调效果最好的片段进行后续实验。下调成功后将JNK信号通路抑制剂加入各组细胞。实验分组为阴性对照组（ NC组）、阴性对照加药组（NC+SP组）、下调组（si-GRASP65组）、下调加药组（si-GRASP65+SP组）。最后，用 CCK-8试剂盒检测各组细胞生长状况，流式细胞术观察各组细胞的凋亡以及周期的改变情况，每个组细胞内蛋白 bcl-2、cleaved caspase3等表达量用Western blot方法检测。 结果： Western blot以及RT-qPCR的结果提示，在SGC7901细胞中，片段编号为1230（si-1230组）的siRNA对GRASP65的蛋白和mRNA表达的抑制效果最好。CCK-8实验结果表明，与NC组相比，NC+SP组细胞的增殖显著减少（P<0.001），而si-GRASP65组与si-GRASP65+SP组之间细胞增殖情况无明显差别（P＞0.05）。流式细胞术指出，NC组凋亡率明显比 NC+SP组低（P<0.01），而下调组加药前后的凋亡率的统计结果显示没有明显差别（P＞0.05）。NC+SP组细胞阻滞于G2期的细胞数明显多于 NC组（P<0.001），而 si-GRASP65+SP组阻滞于 G2期的细胞数明显少于 NC+SP组（P＜0.05）。Western blot结果表明， NC+SP组中细胞内表达的 cleaved caspase3的蛋白量比 NC组高（P<0.001），si-GRASP65+SP组细胞cleaved caspase3的蛋白表达量明显低于si-GRASP65组（P<0.01），而bcl-2的结果与之相反。GRASP65在NC+SP组中的表达量明显低于NC组（P<0.001），而在下调组与下调加药组中其表达量没有明显差别。各组细胞中P-JNK和GM130蛋白的表达变化与GRASP65一致。关于c-jun，NC+SP组的表达低于NC组（P<0.001），而si-GRASP65+SP的表达高于si-GRASP65组（P＜0.05）。 结论： GRASP65参与了JNK信号通路对人胃癌细胞的增殖、凋亡和周期等生物学行为的调控过程，并且是此通路中的关键因子。其机制可能是通过改变JNK的磷酸化状态，调节cleaved caspase3、bcl-2、c-jun等蛋白表达量从而对胃癌细胞增殖、凋亡以及周期产生影响。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

前言

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果

2.1 SGC7901在siRNA瞬转后GRASP65蛋白及mRNA 的表达变化

2.2 CCK-8检测SP600125对SGC7901细胞的最佳作用浓度与时间

2.3 CCK-8测定SP600125对转染前后的SGC7901细胞增殖的影响

2.4 流式细胞术检测细胞凋亡

2.5 流式细胞术检测细胞周期

2.6 Western blot检测各组细胞中GRASP65、P-JNK、GM130、c-jun、cleaved caspase 3、bcl-2的蛋白表达量

3 讨论

全文小结

参考文献

文献综述:GRASP65的功能及其与肿瘤关系的研究进展

1. GRASP65的结构与功能

2. GRASP65与肿瘤的关系

3. 小结

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文