地塞米松通过稳定CD2AP介导的PI3K/Akt信号通路抗足细胞凋亡的作用机制

摘要

目的：借助小鼠肾小球足细胞系，观察嘌呤霉素（puromycin aminonucleoside，PAN)和地塞米松（dexamethasone，DEX）对足细胞凋亡率和足细胞分子CD2AP表达及分布的影响，探讨CD2AP介导的PI3K/Akt信号通路在地塞米松抗肾小球足细胞凋亡中的作用机制。 方法：体外培养小鼠肾小球足细胞系，设立对照组、PAN刺激组和DEX干预组。对照组用含DMSO的RPMI 1640培养液培养，分别予终浓度为50μg/ml PAN，伴或不伴DEX(1μmol/L)共孵育8h，24h和48h，最后收集细胞采用RT-PCR、Western blot和激光共聚焦分别检测PI3K p85，Bad，CD2APmRNA、蛋白表达和分布的变化。另外予终浓度50μg/ml PAN处理细胞不同时间(15,30,45,60,120min)以及予不同终浓度(12.5,25,50,75,100μg/ml) PAN，伴或不伴终浓度为(10-1-101μmol/L)DEX或LY294002(25mmol/L)共孵育15或30min，Western blot检测各组p-Akt,Akt,p-GSK3β,GSK3β蛋白表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果：（1）PAN刺激后CD2AP mRNA和蛋白的表达均明显降低(p<0.05)，PI3K p85蛋白的表达也明显降低(p<0.05)；两者的共定位分布明显异常；Bad mRNA和蛋白的表达均明显升高(p<0.05)；足细胞凋亡率呈PAN浓度依赖性升高(p<0.05)。DEX干预后CD2AP mRNA和蛋白的表达均较PAN刺激组升高 (p<0.05)，PI3K p85蛋白的表达也明显升高(p<0.05)；两者的共定位分布趋向正常；Bad mRNA和蛋白表达较PAN刺激组明显降低(p<0.05)；足细胞凋亡率呈DEX浓度依赖性降低。（2）PAN刺激足细胞15 min后p-Akt的表达最低，而p-GSK3β在30 min时表达最低，p-Akt及p-GSK3β的表达均呈PAN浓度依赖性降低(p<0.05)及DEX浓度依赖性升高。（3）LY294002阻断足细胞p-Akt及p-GSK3β的表达(p<0.01)，LY294002预处理组的足细胞凋亡率显著升高 (p<0.01)。 结论：DEX直接作用于足细胞，稳定足细胞分子CD2AP的表达和分布，使CD2AP与PI3K调节亚基p85的相互作用，PI3K活化，激活PI3K/Akt信号通路，激活Akt活性，升高GSK3β磷酸化水平，降低GSK3β活性，下调下游靶蛋白Bad mRNA和蛋白表达，修复受损足细胞，起到抗足细胞凋亡的作用。

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讨 论

结 论

参考文献

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综述 PI3K/Akt 信号通路与足细胞病的研究进展

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