解毒通络保肾法对高糖刺激下足细胞PI3K/Akt信号通路活化及凋亡相关因子的影响

摘要

目的:本实验采用血清药理学方法，探讨解毒通络保肾含药血清对体外培养的高糖诱导的足细胞ILK表达、调节PI3K/Akt信号通路及对凋亡相关因子的影响，探讨解毒通络保肾中药干预高糖刺激下足细胞损伤发生机制，进一步为解毒通络保肾法治疗DN提供实验依据。
　　方法:建立高糖诱导的足细胞模型。体外足细胞模型+药物干预因素。A组:正常糖组;B组:高糖组;C组:高糖+低剂量药物血清组;D组:高糖+中剂量药物血清组;E组:高糖+高剂量药物血清组。酶联免疫法检测ILK、Akt、Bax、Bcl-2、Caspase-3表达水平。流式细胞仪检测足细胞凋亡率。
　　结果:实验一:通过酶联免疫检测结果显示:与A组相比，B、C、D、E组ILK表达均增加(P＜0.05)，与B组相比，C、D、E组ILK表达均降低，C组无统计学意义(P＞0.05)，D、E组有统计学意义(P＜0.05);与A组比较，B、C、D、E组Akt表达均降低(P＜0.05)，而与B组对比，C、D、E组Akt表达增加，E组有统计学意义(P＜0.05)，C、D组无统计学意义(P＞0.05)。
　　实验二:与A组相比，B、C、D、E组Bax、Caspase-3表达均增加(P＜0.05)，与B组相比，C、D、E组Bax表达均降低，C组无统计学意义(P＞0.05)，D、E组有统计学意义(P＜0.05)，C、D、E组Caspase-3表达均降低(P＜0.05);与A组比较，B、C、D、E组Bcl-2表达均减少(P＜0.05)，而与B组对比，C、D、E组Bcl-2表达增加，C组无统计学意义(P＞0.05)，D、E组有统计学意义(P＜0.05)。流式细胞仪检测足细胞凋亡率结果显示:与A组相比，B、C、D、E组细胞凋亡率均增加(P＜0.01)，与B组相比，C、D、E组细胞凋亡率降低(P＜0.01)，与C组相比，D组E组凋亡率降低(P＜0.01)。
　　结论:1、解毒通络保肾法对高糖刺激下足细胞损伤的保护机制可能是通过阻断ILK介导的PI3K/Akt信号通路，抑制Bax和Caspase-3的激活，上调Bcl-2的表达，降低足细胞凋亡而发挥作用的。2、初步证实ILK-PI3K/AKt信号转导通路是高糖诱导足细胞凋亡的关键通路。3、为解毒通络保肾法治疗DN提供实验依据。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

文献综述 中医药治疗糖尿病肾病实验研究进展

1 中医对糖尿病肾病的认识

1．1 病名的认识

1．2 病因病机

2 现代医学对DN的认识

2．1 DN机制与足细胞损伤

2．2 足细胞损伤的表现

2．3 ILK与PI3K-PKB／Akt信号通路与足细胞损害

3 中医药治疗糖尿病肾病的实验研究

3．1 改善肾小球硬化等病理变化

3．2 抗氧化应激、减轻炎症反应

3．3 上调相关蛋白分子的表达

3．4 抑制凋亡相关因子的表达，抑制细胞凋亡

3．5 抑制信号通路的活化

3．6 抑制足细胞增殖

3．7 维持足细胞表型分子及足细胞结构的作用

3．8 保护和修护大鼠足细胞

3．9 抑制血管内皮生长因子

4 问题与展望

实验研究

1 材料

2 实验方法

3 结果

实验二 解毒通络保肾法对高糖刺激下足细胞凋亡相关因子的影响

1 材料

2 实验方法

3 结果

讨论

1 解毒通络保肾法的理论渊源

2 体外培养小鼠足细胞

2．1 前期预实验

2．2 实验一：P13K-Akt信号通路活化代表因子ILK及Akt的结果

2．3 实验二：凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及足细胞凋亡率的结果

结论

结语

致谢

参考文献