榄香烯联合替莫唑胺对胶质瘤细胞增殖抑制作用的研究

摘要

[目的]
　　1.观察榄香烯(ELE)、替莫唑胺(TMZ)以及联合用药对人胶质瘤细胞株U87及U87干细胞样细胞(GSLC)增殖抑制的影响;
　　2.观察榄香烯、替莫唑胺以及联合用药分别对U87及U87GSLC的裸鼠皮下移植瘤的生长抑制效果;
　　3.探讨榄香烯联合替莫唑胺抑制U87及U87GSLC增殖的可能机制。
　　[方法]
　　1.体外培养人胶质瘤细胞株U87以及U87GSLC，细胞毒性/增殖检测试剂盒(CCK-8)检测计算榄香烯、替莫唑胺不同浓度单药及榄香烯联合不同浓度替莫唑胺处理后的细胞增殖抑制率;
　　2.分别建立U87、U87GSLC的裸鼠皮下移植瘤模型，各类模型分为空白对照组(Control)、ELE组、TMZ组、ELE+TMZ组，观察成瘤情况，成瘤后按分组给予药物腹腔注射处理，观察给药后肿瘤生长情况。
　　3.免疫印迹试验(western blot)检测榄香烯、替莫唑胺及联合用药后U87以及U87GSLC内的干细胞自我更新相关通路蛋白Notch1及碱基切除修复通路(BER)关键蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)表达水平的变化。
　　[结果]
　　1.榄香烯和替莫唑胺均可抑制胶质瘤细胞U87及87GSLC增殖，抗肿瘤作用具有剂量依赖性，相同药物浓度下，榄香烯对U87GSLC增殖抑制作用较U87强，而替莫唑胺对U87增殖抑制作用较U87GSLC强，联合用药效果表现为协同作用。
　　2.动物实验结果显示，皮下注射U87GSLC组的裸鼠成瘤的时间比注射U87组短，U87GSLC移植瘤组瘤体最终体积大小为:空白对照组＞TMZ组＞ELE组＞ELE+TMZ组;U87移植瘤组瘤体最终体积大小为:空白对照组＞ELE组＞TMZ组＞ELE+TMZ组。
　　3.免疫印迹试验结果示，在U87GSLC中，榄香烯可降低的Notch1的表达，表达水平与药物浓度负相关，替莫唑胺对Notch1的表达水平无明显影响，固定榄香烯浓度联合替莫唑胺用药可使U87GSLC中的Notch1的表达水平随替莫唑胺浓度增加而下调，但在U87中榄香烯、替莫唑胺单药及联合用药对Notch1表达水平影响不明显;榄香烯可下调U87GSLC和U87的PARP-1的表达，呈浓度依赖性，而替莫唑胺对PARP-1无明显作用，固定榄香烯浓度联合替莫唑胺用药可使U87GSLC和U87的PARP-1表达水平随替莫唑胺浓度增加而下调。
　　[结论]
　　1.体外实验表明，榄香烯及替莫唑胺均具有抗胶质瘤增殖的作用，榄香烯对U87GSLC中的生长抑制作用强于U87，提示相比于普通胶质瘤细胞，榄香烯可能对GSLC具有更高的敏感性，而替莫唑胺在体外细胞实验中表现为对U87敏感性高于U87GSLC，两者联合应用可提高替莫唑胺抑制胶质瘤细胞及胶质瘤干细胞样细胞增殖效果，作用效果表现为协同作用。
　　2.裸鼠体内实验表明:在裸鼠皮下，U87GSLC具有比U87更强的致瘤能力，榄香烯对U87GSLC移植瘤模型的肿瘤生长抑制效果好，而替莫唑胺则对U87移植瘤模型的肿瘤生长抑制作用强，联合用药对肿瘤生长抑制作用在两种移植瘤模型中均优于单药应用。
　　3.榄香烯增加替莫唑胺对U87的增殖抑制作用可能是通过下调PARP-1的表达发挥作用;而榄香烯增加替莫唑胺对U87GSLC的增殖抑制作用可能是通过调节Notch1、PARP-1的表达水平来实现的。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 胶质瘤耐药与Notoh信号通路、PARP-1的关系研究进展

致谢

附录

在读期间的科研情况