藤黄酸对肺癌顺铂耐药细胞增殖和耐药性的影响及其机制研究

摘要

【目的】 研究藤黄酸对人肺腺癌顺铂耐药细胞的增殖及耐药性的影响，并初步探讨其可能的机制。 【方法】 1.采用CCK-8法检测顺铂和藤黄酸对人肺腺癌顺铂敏感细胞A549、顺铂耐药细胞A549/DDP增殖的影响。人肺腺癌细胞A549、A549/DDP分别用不同浓度顺铂（0,2.5,5,10,20,40μg/ml）及藤黄酸（0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0μM）作用24h和48h后，用CCK-8测定其细胞增殖抑制率并计算顺铂和藤黄酸不同作用时间的IC50及耐药株A549/DDP细胞顺铂耐药指数。选用2.0μM藤黄酸与不同浓度的顺铂（0,2.5,5,10,20,40μg/ml）联合作用于A549以及A549/DDP细胞24h和48h后，用CCK-8测定其细胞增殖抑制率并计算顺铂联合藤黄酸时顺铂的IC50及藤黄酸下调耐药株A549/DDP细胞顺铂耐药的倍数。 2.采用流式细胞仪PI单染色法检测藤黄酸（0,1.0,2.0μM）处理24h对人肺腺癌细胞A549、A549/DDP细胞周期分布的影响。 3.采用流式细胞仪Annexin V/PI双染色法检测藤黄酸和/或顺铂对人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞凋亡的影响。首先用单独用藤黄酸处理肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP，处理分别为按藤黄酸浓度变化（0,0.5,1,2μM）处理24h和2μM藤黄酸时间变化处理（0,24,48,72 h）。然后，实验分为对照组、藤黄酸组（2μM）、顺铂组（10 ug/ml）、联合组，分别培养24、48、72h后，用流式细胞仪检测药物处理后细胞凋亡情况。 4.采用蛋白印迹法检测藤黄酸单药及藤黄酸联合顺铂对人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的凋亡相关蛋白caspase-9和caspase-3的表达水平影响以及藤黄酸对耐药相关蛋白LRP和MRP2的表达水平的影响。 【结果】 藤黄酸有抑制顺铂耐药株A549/DDP细胞的增殖，诱导细胞周期阻滞于G0/G1期，诱导细胞凋亡的作用；藤黄酸可降低A549/DDP细胞的耐药指数；藤黄酸联合顺铂组的细胞凋亡比例及凋亡相关蛋白切割caspase-3表达水平明显高于其他处理组，而前体caspase-9蛋白表达水平明显低于其他处理组；藤黄酸可降低A549/DDP细胞中的耐药相关蛋白MRP2、LRP蛋白表达水平。 【结论】 藤黄酸通过诱导人肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP细胞周期阻滞和细胞凋亡而发挥增殖抑制作用；藤黄酸通过增强顺铂对耐药株A549/DDP细胞的诱导凋亡作用，并且下调A549/DDP细胞中的MRP2和LRP蛋白表达从而降低其顺铂耐药性。因此，本研究提示藤黄酸可能能够在肺癌发生顺铂耐药时发挥重要的抗肿瘤作用，其有望成为解决肺癌顺铂耐药问题的新型有效化疗药物，为肺癌治疗策略提供新的指引和理论依据。

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1 前言

1.1 研究背景

1.2 研究目的

1.3 研究内容

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

3 结果

3.1 A549，A549/DDP细胞对顺铂敏感性比较

3.2 藤黄酸抑制人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP细胞的增殖

3.3 藤黄酸阻滞人肺腺癌细胞株A549，A549/DDP细胞于G0/G1期

3.4 藤黄酸诱导人肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP细胞凋亡

3.5 藤黄酸下调耐药株A549/DDP细胞的顺铂耐药指数

3.6 藤黄酸联合顺铂对A549/DDP细胞增强诱导凋亡作用

3.7 藤黄酸下调肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞株MRP2和LRP蛋白表达

4 讨论

5 小结

参考文献

综述:藤黄酸抗肿瘤机制研究进展

致谢

附录一 缩写词中英文对照

附录二 在攻读硕士期间的科研情况