鱿鱼内脏糖蛋白提取分离及其免疫调节作用的研究

摘要

糖蛋白是指由寡糖与多肽链共价连接而成的一类结合蛋白质。研究表明，糖蛋白具有调节免疫、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等作用，在新型特种药物及功能性食品开发方面具有广阔的应用前景。 本文检测了鱿鱼内脏的营养成分，优化了鱿鱼内脏中糖蛋白的提取工艺，对鱿鱼内脏糖蛋白进行了分离、纯化，并对其免疫调节活性进行研究，为综合利用鱿鱼内脏资源提供理论依据。 通过对鱿鱼内脏营养成分检测结果显示：鱿鱼内脏中主要营养成分是蛋白质和脂肪，分别为57.62％和14.76％，总糖含量较高，为8.76％；氨基酸总量为46.4％，必需氨基酸和氨基酸总量的比值以及必需氨基酸和非必需氨基酸比值分别为37.3％和0.59。在所测的氨基酸中，谷氨酸含量最高，为6.47％，必需氨基酸中亮氨酸含量最高，为3.62％；脂肪酸中EPA和DHA含量较高，分别为14.29％和20.23％；矿物质元素中Ca、Mg、P含量充足，Zn、Fe、Cu等微量元素含有较高，分别为40.5μg/g、10.3μg/g、1.1μg/g。 以糖蛋白得率为指标，分别研究了料液比、温度、提取时间及提取液盐浓度对鱿鱼内脏糖蛋白提取得率的影响，并根据L9(34)正交表综合分析确定最佳提取工艺条件为：料液比为1:6、浸提时间为55min、浸提液盐浓度为3％、浸提温度为80℃。 采用硫酸铵分级沉淀和SephadexG-100凝胶柱层析相结合，对鱿鱼内脏糖蛋白进行了分离纯化。用硫酸铵的饱和度分别为20-40％，40-60％，60-80％分三级沉淀糖蛋白，得到GSV-1、GSV-2和GSV-3，再对其进行SephadexG-100凝胶过滤，使分级蛋白中的蛋白质按其分子量的大小先后洗脱，分别收集到鱿鱼内脏糖蛋白GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1。并检测了上述样品的部分理化指标。通过SDS-聚丙烯酰胺电泳分析结果表明，鱿鱼内脏糖蛋白的分子量范围在36KD-130KD之间；对纯化后样品进行红外光谱分析说明，这些样品具有典型的糖蛋白的特征吸收峰。 本文研究了鱿鱼内脏糖蛋白对KM小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫三方面影响，确定其免疫调节作用。具体实验方法是：小鼠炭廓清实验和免疫器官重量的测定；MTT法检测NK活性和小鼠脾细胞增殖实验；血清溶血素水平和抗体生成细胞数的测定。实验结果如下： (1)鱿鱼内脏糖蛋白粗品(GSV-0)三个剂量均对免疫抑制小鼠和正常小鼠的廓清指数有显著的增强作用；GSV-0在10mg/kg剂量对免疫抑制小鼠的胸腺指数有显著的提高作用，GSV-0在30mg/kg、100mg/kg剂量对正常小鼠的胸腺指数有非常显著和显著提高作用。 (2)GSV-0、GSV-1和GSV1-1只在较高剂量时显著促进小鼠脾细胞增殖，而GSV-2、GSV-3、GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1在低剂量时就能显著促进小鼠脾细胞增殖；GSV不能增强有丝分裂原ConA诱导的脾细胞增殖反应；GSV对NK细胞活性的影响随着的纯度的提高而明显增强，且样品GSV1-1、GSV2-1和GSV3-1在各个剂量上，均对NK细胞都有明显的增强作用。 (3)GSV-0在中、高剂量时，显著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠的血清溶血素水平和增加小鼠抗体生成细胞数量，提高小鼠的体液免疫功能。 鱿鱼内脏糖蛋白能够显著提高KM小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能，所以可以认为鱿鱼内脏糖蛋白具有一定的增强免疫功能。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要缩略词表

声明

第一章前言

1研究背景

1.1鱿鱼内脏的利用现状

1.2糖蛋白的研究进展

2本论文的研究目的意义

3研究内容

第二章鱿鱼内脏的营养成分分析

1引言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2主要仪器与设备

2.3主要试剂

2.4实验方法

3结果与讨论

3.1鱿鱼内脏一般营养成分含量

3.2氨基酸的测定

3.3脂肪酸的测定

3.4矿物质元素的测定

4本章小结

第三章鱿鱼内脏糖蛋白提取纯化及其理化性质的研究

1引言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2主要仪器与设备

2.3实验方法

3结果与讨论

3.1鱿鱼内脏糖蛋白的提取单因素试验

3.2提取糖蛋白最佳工艺条件的确定

3.3硫酸铵分级沉淀鱿鱼内脏糖蛋白

3.4 GSV的Sephadex G-100凝胶过滤

3.5 GSV成分分析

3.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

3.7 GSV红外分析

4本章小结

第四章鱿鱼内脏糖蛋白免疫活性的研究

1引言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2主要仪器与设备

2.3免疫活性实验

3结果与讨论

3.1鱿鱼内脏糖蛋白的非特异性免疫活性

3.2鱿鱼内脏糖蛋白的细胞免疫活性

3.3鱿鱼内脏糖蛋白的体液免疫活性

3.4讨论

4本章小结

第五章总结论

1本论文的主要研究成果

2研究展望

参考文献

致谢

导师简历

作者简历