围产期奶牛血清蛋白质组学的初步研究

摘要

本研究目的是对围产期奶牛血清中蛋白质组的变化进行初步探索，共包括以下三部分：
　　 第一部分：通过ELISA方法对围产期奶牛血清中免疫蛋白的变化进行研究。采集36头中国荷斯坦奶牛，分为临床健康奶牛组(n=26)和高体细胞数奶牛组(n=10)。利用酶联免疫吸附试验，检测围产期奶牛血清中免疫球蛋白、转铁蛋白和白蛋白的变化规律。试验结果表明：临床健康奶牛血清中IgM浓度在分娩前后无显著变化，高体细胞数奶牛血清中IgM浓度显著高于临床健康奶牛(P=0.03)；临床健康奶牛血清中IgG浓度在分娩后升高，高体细胞数奶牛血清中IgG浓度与临床健康奶牛无显著差异；临床健康奶牛血清中IgA浓度在分娩前后无显著变化，分娩后第7天和第21天，高体细胞数奶牛IgA浓度显著高于临床健康奶牛(P=0.03；P=0.04)；临床健康奶牛血清中转铁蛋白浓度临近分娩呈升高趋势，分娩后降低，高体细胞数奶牛血清中转铁蛋白浓度与临床健康奶牛无显著差异；临床健康奶牛血清中白蛋白浓度在分娩前后无显著变化，高体细胞数奶牛分娩前白蛋白浓度高于分娩后。奶牛临近分娩和分娩后血清中免疫球蛋白、转铁蛋白和白蛋白的变化与围产期免疫功能下降有关。
　　 第二部分：采用肽文库试剂盒ProteoMiner富集荷斯坦奶牛的血清，运用二维凝胶电泳结合液相色谱串联质谱方法，分析富集前后血清蛋白的变化。结果表明，牛血清经ProteoMiner试剂盒富集，白蛋白含量显著下调(血清的差异显著水平P=0.01)，载脂蛋白E显著增加(血清的差异显著水平为P=0.01)。该法在降低牛血清中高丰度蛋白的同时有效富集了低丰度蛋白，有利于血清中低丰度蛋白质组的研究。
　　 第三部分：通过定量蛋白质组学方法对围产期奶牛血清中蛋白质含量的变化进行研究。采集8头中国荷斯坦奶牛，分别采集产前21d、产后1d的血清样品，经ProteoMiner试剂盒富集后的血清蛋白采用同位素相对标记与绝对定量技术标记，串联质谱鉴定。试验结果表明：共鉴定78个血清蛋白，其中，结合珠蛋白、脂多糖结合蛋白等19个蛋白在分娩后血清中表达量增加1.5倍以上。其中，结合珠蛋白增加4.72倍，脂多糖结合蛋白增加2.23倍。但是，共凝集素表达量下降11.24倍。本实验为研究奶牛的免疫应答机制提供了理论基础。