食用油中DNA成份提取和检测方法研究

摘要

在人们日常生活中，食用植物油不可或缺，它能为人们提供身体所必须脂肪和热量，另一方面，它本身含有的营养物质对人类身体有益。食用油的高沸点和其他理化特征使其适合用于加工食物，可以煎炒炸等，极大程度上丰富了人们的生活饮食。其质量好坏不仅关系着食物的口感和色泽等，另一方面，劣质的食用油也会不利于消费者的身体健康。从全球植物油脂的生产量和消费量可以看出植物油在全球经济的重要性越来越显著。本研究主要关注食用油安全的两个方面:一是转基因食用油的标识情况，消费者具有知情权和选择权。二是不良商家可能会向高价的油脂中掺入低价的油脂。
　　国内外的学者发展了众多的食用油研究方法，其中主要原理分为理化检测和分子生物学检测。本文主要研究利用分子生物学手段检测食用油脂。运用分子生物学方法检测食用油是否掺假掺杂或含有转基因成分的关键在于其DNA能否成功提取。本文首先收集现有的油脂DNA提取方法和DNA检测方法，同时收集不同等级的食用菜籽油，用所收集的方法提取菜籽油中的DNA，采用实时荧光定量PCR扩增检测油菜内标准基因CruA，最后分析实时荧光定量PCR的结果比较和优化DNA提取方法，从中选择5种提取方法应用于所有植物油脂DNA的提取，这五种方法是改进乳化法、磁珠法试剂盒、油类DNA提取试剂盒、MN试剂盒和DN试剂盒。
　　在后续的实验中，我们收集了25份不同种类和级别的食用油，采用这5种提取方法提取其中的DNA。所有从样品中提取的DNA，通过Nanodrop2000微量分光光度计测量DNA浓度和纯度，同时采用实时荧光定量PCR技术扩增检测几大主要油料作物的内源基因和植物特异内源基因tRNAleu。从DNA浓度和纯度测量结果以及Real-time PCR扩增结果，比较5种不同的食用油DNA提取方法，改进乳化法从样品中提取的DNA浓度最高，树脂法试剂盒提取样品DNA浓度高于磁珠法试剂盒、MN试剂盒和DN试剂盒3种提取方法。而改进乳化法由于加入了鲑鱼精子DNA，所以DNA浓度较高，平均值在1000ng/μL。分析实时荧光定量PCR结果，改进乳化法提取的DNA扩增效果显著优于另外四种试剂盒，MN试剂盒和DN试剂盒提取样品有所局限性。本研究为开展精炼食用油的分子生物学检测和保障食用油安全提供了重要的技术参考。

目录

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 研究背景

1．1．1 我国食用油消费情况

1．1．2 食用油生产加工情况

1．1．3 食用油脂进口情况

1．2 食用油检测技术研究进展

1．2．1 理化检测

1．2．2 核酸检测

1．3 本论文研究的主要内容及目的意义

1．3．1 立题依据(国内外研究现状与趋势、选题目的和意义)

1．3．2 研究目标

1．3．3 研究内容

1．3．4 实验技术路线

第二章 菜籽油DNA提取方法的比较

2．1 实验材料和方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验方法

2．2 结果分析

2．2．2 食用菜籽油中DNA内标准基因的实时荧光定量PCR扩增

2．3 讨论

2．3．1 菜籽油样品之间的差异比较

2．3．2 提取方法效率比较

第三章 商业化食用油DNA提取方法及其评价

3．1 实验材料和方法

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验方法

3．2 结果分析

3．2．1 5种DNA提取方法比较

3．2．2 提取DNA质量检测

3．2．3 实时荧光定量PCR检测

3．3 讨论

3．3．1 提取方法效率比较

3．3．2 食用油样品之间的差异比较

第4章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历