文摘
英文文摘
论文说明：英文缩写
声明
第一章引言
1.1概述
1.2研究对象
1.2.1标记基因的种类
1.2.2潮霉素磷酸转移酶及作用原理
1.3原核表达系统的研究进展
1.3.1表达载体及其特点
1.3.2外源基因在大肠杆菌细胞中的表达
1.4真核表达系统
1.4.1酵母表达系统
1.4.2昆虫细胞表达系统
1.4.3哺乳动物细胞表达系统
1.5转基因食品过敏性评价研究现状
1.5.1外源基因的供体为常见过敏原的转基因食品致过敏性评价
1.5.2外源基因供体为不常见过敏原的转基因食品致过敏性评价
1.5.3外源基因供体无食用和食物过敏史的转基因食品致过敏性评价
1.6本实验研究的目的、意义及主要内容
1.6.1转基因材料的来源
1.6.2序列同源性
1.6.3体外消化模拟试验
1.6.4受热或加工的稳定性
1.6.5动物模型试验
第二章表达质粒pET30a-hpt及重组大肠杆菌菌株的构建
2.1引言
2.2材料
2.2.1菌株和质粒
2.2.2主要试剂
2.2.3仪器
2.2.4常用溶液配制
2.3方法
2.3.1潮霉素磷酸转移酶基因(htp)的克隆
2.3.2重组表达质粒pET30(+)-hpt的构建
2.3.3原核表达体系的构建
2.4结果与讨论
2.4.1hpt基因的亚克隆
2.4.2重组质粒pET30(+)-hpt的鉴定
2.5本章小结
第三章pET30a-hpt在大肠杆菌中的诱导表达、纯化及活性检测
3.1引言
3.2主要试剂与仪器
3.2.1 Tricine-SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)所用试剂及溶液
3.2.2亲和层析所用试剂及溶液
3.2.3饱和硫酸铵溶液的制备
3.2.4 ELISA试剂的配制
3.2.5 Western Blotting试剂配制
3.2.6主要仪器和设备
3.3方法
3.3.1蛋白的初步表达
3.3.2硫酸铵初步纯化
3.3.3亲和纯化
3.3.4目的蛋白的大量表达和纯化
3.3.5酶切去标签
3.3.6 HPT蛋白鉴定
3.3.7 HPT蛋白多抗的制备
3.3.8效价的测定
3.3.9交叉反应率测定
3.4结果与讨论
3.4.1蛋白表达
3.4.2硫酸铵分步沉淀
3.4.3亲和层析纯化蛋白
3.4.4蛋白鉴定
3.4.5效价测定以及交叉反应率结果
3.5本章小结
第四章致敏性评价
4.1引言
4.2材料和试剂
4.2.1实验动物
4.2.2主要试剂
4.3方法
4.3.1氨基酸序列比较
4.3.2体外消化及热稳定实验
4.3.3半干转移法测定消化产物
4.3.4动物饲养
4.3.5实验处理
4.3.6实验方法
4.3.7 BN大鼠血清中蛋白特异性IgG检测
4.3.8 BN大鼠血清中蛋白特异性IgE检测
4.3.9 BN大鼠组胺检测
4.3.10统计学分析
4.4结果与讨论
4.4.1氨基酸序列相似性比较
4.4.2体外消化
4.4.3 BN大鼠特异IgG、IgE测定结果
4.4.4 BN大鼠组胺检测结果
4.5本章小结
第五章结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
