丹参注射液对大鼠急性脊髓损伤后运动功能的作用及机制

摘要

目的: (1)观察丹参注射液对大鼠急性脊髓损伤后运动功能的作用。 (2)探讨丹参注射液对大鼠急性脊髓损伤后运动功能的作用机制。 方法: 1.动物造模、分组及干预方法(1)动物造模SD雄性大鼠144只，麻醉后俯卧位固定于手术台上，消毒后以T11为中心取后正中切口，咬除T10～T12椎板和棘突，用硬塑料片保护T10和T12脊髓，只暴露T11脊髓。采用改良Allen法致伤脊髓:以10 g不锈钢杆自三维立体定向仪上经套筒自由坠落4 cm，撞击T11脊髓，然后移去不锈钢杆，打击区脊髓硬脊膜下可见充血，观察到鼠尾痉挛性摆动，双下肢及躯体痉挛收缩，示造模成功。另选取SD雄性大鼠48只作为假手术组，采用上述手术方法，不撞击脊髓。 (2)分组144造模大鼠，随机分为观察组、对照组和SCI组，每组各48只，3组又各分为造模后1、3、7及14天组，每组12只。 (3)干预方法观察组:于造模后1h给予丹参注射液1.78mL/kg/天，腹腔内注射，每天1次，按存活时间分别注射1、3、7、14天。对照组:采用大剂量冲击疗法，于造模后1h腹腔注射甲基强的松龙30 mg/kg，45min后按5.4 mg/kg/h计算23h总量，分4次腹腔注射。假手术组和SCI组:不进行任何干预。分别于手术后1天、3天、7天、14天，分组分批取材。 2.实验指标检测 (1)各组大鼠一般状态比较。 (2)行为学评分采用改良Rivlin斜板法评分来评价大鼠的脊髓功能。 (3)组织病理学观察光学显微镜下观察脊髓造模后1天、3天、7天、14天的细胞结构变化。 (4)原位杂交检测包括胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、乙酰胆碱转化酶(ChAT)、突触体素(synaptophysin)、突触素(syn apsinⅠ)、突触结合蛋白Ⅰ(sytⅠ)。 3.统计学处理:将所得数据用SPSS11.0版统计软件进行统计。 结果: 1.各组大鼠一般状态比较:损伤1天后，各组大鼠毛发散乱，后肢无法运动，呼吸较浅，饮食减少，尿失禁或尿潴留。损伤3天后观察组与对照组毛色散乱，后肢能轻微活动，但不能支撑爬行，SCI组后肢毛色干枯、散乱，无任何活动，均呼吸较浅、饮食减少、尿失禁或尿潴留。损伤7天后，观察组和对照组动物毛色变润泽、整齐，后肢活动增强，无法支撑爬行，呼吸正常，饮食有所增加，尿失禁或尿潴留有所改善，SCI组无明显变化。损伤14天后观察组和对照组动物毛色润泽、整齐，后肢活动增强，稍可支撑爬行，呼吸正常，饮食接近正常，排尿趋于正常，SCI组毛发散乱，后肢轻微活动，呼吸接近正常，饮食有所增加，尿失禁或尿潴留有所改善。 2.行为学评分:各组损伤前斜板试验临界角比较，差异无统计学意义。造模后1天，观察组斜板试验临界角低于治疗前及对照组同期;造模后3天，观察组斜板试验临界角与造模后1天比较，差异无统计学意义;造模后7天，观察组斜板试验临界角高于造模后3天及SCI组同期，低于对照组;造模后14天，观察组斜板试验临界角高于造模后7天及SCI组同期，与对照组无显著差异。 3.组织病理学改变:脊髓造模后1天，SCI组脊髓损伤灰质区明显出血、水肿，部分神经元变性坏死;观察组和对照组部分神经元坏死，但出血、水肿较轻。造模后3天，SCI组脊髓损伤灰质区仍明显出血、水肿，神经元坏死增多;观察组出血、水肿减轻，神经元坏死稍增多;对照组出血、水肿减轻，神经元坏死增多。造模后7天、14天，SCI组脊髓损伤灰质区出血、水肿减轻;观察组和对照组出血、水肿均明显减轻。 4.原位杂交检测结果 (1)胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达造模后1天，观察组GDNF阳性产物吸光度值低于对照组同期，高于SCI组同期;造模后3天，高于造模后1天及SCI组同期，低于对照组同期;造模后7天，与造模后3天及对照组同期无显著差异，高于SCI组同期;造模后14天，与造模后7天及对照组同期无显著差异，高于SCI组同期。 (2)乙酰胆碱转化酶(ChAT)表达造模后1天，观察组的ChAT阳性产物吸光度值低于对照组，与SCI组无显著差异;在造模后3天、7天的乙酰胆碱转化酶阳性产物吸光度值低于对照组，高于SCI组;在造模后14天与对照组无显著差异，高于SCI组。 (3)突触体素(synaptophysin)表达造模后1天、3天，观察组的synaptophysin阳性产物吸光度值与对照组和SCI组无显著差异，在造模后7天、14天高于SCI组，与对照组无显著差异。 (4)突触素Ⅰ(synapsinⅠ)表达造模后1天、3天，观察组的synaptophysin吸光度值与对照组和SCI组无显著差异，在造模后7天、14天高于SCI组，与对照组无显著差异。 (5)突触结合蛋白Ⅰ(SytⅠ)表达观察组在造模后1天sytⅠ阳性产物吸光度值与对照组和SCI组无显著差异;造模后3天低于对照组，高于SCI组;在造模后7天、14天高于SCI组，与对照组无显著差异。 结论: (1)丹参注射液对急性脊髓损伤运动功能具有保护作用; (2)丹参注射液对急性脊髓损伤灰质的保护机制:可能通过促进脊髓灰质突触体素、突触素Ⅰ、突触结合蛋白Ⅰ、胶质细胞源性神经营养因子、乙酰胆碱转化酶合成，加快脊髓灰质突触的功能恢复。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

1 研究目的

2 材料与方法

2．1 材料

2．2 方法

3 结果

3．1 各组大鼠一般状态

3．2 各组大鼠各时间点脊髓运动功能比较

3．3 组织病理学改变

3．4 原位杂交检测结果

4 讨论

4．1 脊髓继发性损伤病理机制

4．2 本实验设计

4．3 丹参

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述 丹参对脊髓损伤的影响

作者简历