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下水処理水中のβ-グルクロニダーゼ活性を利用した簡易迅速大腸菌定量法の開発

机译:开发一种简单快速的方法来处理污水中使用β-葡萄糖醛酸苷酶活性定量大肠杆菌

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摘要

大腸菌は糞便汚染の指標であり,大腸菌群に替わる下水処理水の指標細菌としての利用が議論されている.現在の大腸菌数測定法は,培地の作製,希釈,18時間以上の培養,陽性の判定など多大な労力を要する.そこで我々は簡易迅速大腸菌定量法を開発することを試みた.具体的には,下水に特定酵素蛍光基質(4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide; MUG),有機物,無機塩類を加え,大腸菌が生産した酵素β-ダルクロニダーゼ(GUS)によってMUGが分解されることで生ずる蛍光をマイクロプレートリーダーで検出することで,陽性を自動的に判定することを試みた.まず,GUSをコードする遺伝子(uidA)量およびそのmRNA発現量を測定し,蛍光強度増加速度(すなわちMUG分解速度)との関連を検討した.次に本法で下水処理水中の大腸菌数を簡易かつ迅速に定量できるかを検討した.
机译:大肠杆菌是粪便污染的指标,目前正在讨论将其用作已处理污水的指标细菌而不是大肠菌的方法,目前用于测量大肠杆菌数量的方法是培养基制备,稀释,培养18小时或更长时间。因此,我们尝试开发一种简单,快速的大肠杆菌定量方法,特别是在污水中,一种特定的酶荧光底物(4-Methylumbelliferyl-β-D-首先,我们尝试通过添加无机盐并通过酶标仪检测大肠埃希氏菌产生的β-dalcronidase(GUS)酶分解MUG产生的荧光来自动确定阳性。测量GUS编码基因(uidA)的量及其mRNA表达水平,并检查其与荧光强度增加速率(即,MUG降解速率)的关系,并检查其是否可以快速定量。

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