インフルエンザウイルスのヒ卜感染性と亜型の同時鑑別のためのグラフェンFETを用いたhorseradish peroxidase反応の検出

摘要

近年、変異により新たにヒト感染性を獲得したインフルエンザウイルス(IFV)の発生•流行が世 界的に危惧されており、そうしたIFVの迅速検出、及びワクチン接種のための亜型同定が必要と されている。我々は、検出対象の表面電荷に鋭敏に応答するダラフェンを用いた電界効果トラン ジスタ（G-FET)を、IFVがヒト感染時に足掛かりとするヒト型シァロ糖鎖で修飾し、IFVのヒト感 染性を高感度に鑑別することに成功してきた[1]。検出したIFVに亜型特異的な抗体を結合させれ ば亜型鑑別が可能だが、ここにデバイ長の問題がある。生理的塩濃度下でのデバィ長はIFVより はるかに小さいため、IFVに結合した抗体はG-FETでほとんど検出できない。一方で我々は、酵 素分子horseradish peroxidase(HRP)をその反応産物により検出できることを示してきた[2]。そこで、 亜型特異的な抗体にHRPを複合体化して抗体の結合を検出する、「ダラフェン電荷検出型ELISA 法」を構想した。本法ではダラフェン上に捕捉したIFVの電荷でヒト感染性を鑑別し、酵素抗体 複合体を結合させたのち、全体をpL体積の微小液滴に封入することで、微量の酵素反応産物を濃 縮し、高感度に亜型を同定する。