禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H基因在真核细胞中的表达及检测

摘要

利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1050 bp的外膜蛋白H基因(omph)片段,克隆到pMD18-T上。再亚克隆到真核载体pOMPH,(+)上,构建重组质粒pOMPH,将该重组质粒体外转染sP2／0细胞,检测其表达情况。结果表明本试验成功构建了真核表达质粒pOMPH,通过RT-PCR由转染了重组质粒的sP2／0细胞中扩增出了目的条带,westem blotting分析结果显示重组质粒poMPH转染的SP2／0细胞泳道出现38 ku的特异条带,间接免疫荧光分析表明在转染了pOMPH的SP2／0细胞中出现绿色荧光,说明。omph基因在SP2／0细胞中成功表达了活性蛋白,从而为进一步研制DNA疫苗奠定了基础。