草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

摘要

由草鱼呼肠孤病毒引起的草鱼出血病给我国淡水鱼养殖造成了巨大的经济损失。变异迅速和复杂的病原学是导致其流行的主要原因，根据已发表的全基因组或部分节段基因序列信息，总体上可以将草鱼呼肠孤病毒分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三个类型。本研究针对各类型毒株的保守区域分别设计三对引物，优化反应条件和体系，建立了草鱼呼肠孤病毒三重RT-PCR检测方法，通过PCR扩增获得大小约为530bp、297bp和196bp的DNA片段。进一步分析表明该检测方法具有良好的扩增效率、特异性和稳定性，该方法的建立对草鱼出血病的快速诊断和分子流行病学调查具有重要意义。用建立的多重RT-PCR方法对2008-2011年采集自江西、广东、湖北、浙江、重庆、四川、福建等草鱼主养区的86份草鱼出血病样品进行检测和初步流行病学分析。结果表明，Ⅰ型阳性率为9_3%，Ⅱ型阳性率为45_3%，Ⅲ型阳性率为2-3%，Ⅰ型和Ⅱ型混合感染阳性率为5.8%，Ⅱ和Ⅲ型混合感染阳性率为2.3%，其它类型的混合感染未检测到，表明目前主要流行的草鱼呼肠孤病毒为Ⅱ型。