ATM磷酸化PTEN介导拓扑替康诱导肿瘤细胞自噬及其分子机制

摘要

目的:探讨ATM , PTEN介导拓扑替康诱导肿瘤细胞自噬及其分子机制，阐明PTEN在DNA损伤介导肿瘤细胞自噬中的作用。方法:体外培养人肺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞，用分子克隆技术建立稳定或瞬时转染质粒的细胞株；用激光共聚焦显微镜术观察PTEN核转位、YFP-LC3的点状聚集及γ-H2AX聚焦点的形成。结果:Western blot法显示拓扑替康诱导A549细胞与HeLa细胞ATM的磷酸化，呈现浓度、时间依赖性:激光共聚焦显微镜和Western blot法显示拓扑替康可诱导PTEN核转位，当用ATM特异性抑制剂KU55933或siRNA-ATM抑制了ATM激酶话性后，PTEN核转位被抑制。结论:拓扑替康可诱导A549细胞和HeLa细胞发生ATM磷酸化、细胞自噬和DNA损伤，且呈浓度、时间依赖性:拓扑替康在A549细胞和HeLa细胞内通过ATM激酶磷酸化PTEN蛋白S113，诱导PTEN核转位.介导细胞自噬、抑制DNA损伤；在A549细胞和HeLa细胞内，沉默PTEN拓扑替康诱异的自噬被抑制，过表达PTEN则促进自噬发生。