梧桐花粉过敏原(Pla a 1)的表达纯化及其单克隆抗体的制备

摘要

梧桐花粉(P.acerifolia)被认为是在许多城市空气中的过敏原的重要来源.Plaa1是梧桐花粉中一个主要的过敏原.本研究主要是梧桐花粉过敏原(Plaa1 )的表达纯化及其单克隆抗体的制备.在本研究中,Plaa1包载于pET-28a空载质粒中,并转化成ArcticExpressTM (DE3)RP大肠杆菌宿主菌株中.将Plaa1接种于BALB/c小鼠.当血清检测结果为阳性,小鼠脾脏细胞将从小鼠中分离出来,并与SP2/0骨髓瘤细胞融合,其比例为10∶1.杂种细胞细胞接受间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和有限稀释.腹水抗体由阳性细胞诱导,然后被A-agarose蛋白质纯化.最后,Pla a 1成功重组表达和纯化.它表现出IgE结合于P.acerifolia过敏患者血清.十一个杂交细胞不断分泌抗体,得到pla a 1的单克隆抗体,免疫印迹分析表明,这些单克隆抗体能够识别Plaa1.结果表明anti-Pla1得到了抗体与特异性,可用于Plaa1过敏原的快速检测.