动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

摘要

将E.Coli O157∶H7(EHEC-O157∶H7)用甲醛灭活超声破碎，免疫BALB/c小鼠，制备免疫脾细胞;与SP/20骨髓瘤细胞融合后，获得七株分泌抗E.Coli O157∶H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株，分别命名为2E7、B8、E7、D3、H7、F1和C3，Ig亚类分别是IgG2bK、IgG2aK.IgGlK、IgMK，IgMK，IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测，E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×10 3，腹水效价均为1×1011;C3、2E7、B8、D3和H7细胞培养上清液的效价为1×101～2×102，腹水效价均为4×102～2.5×106。相加ELISA结果显示，D3和H7 mAbs对应相同的抗原表位，而其它五株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性，2E7、H7和D3为抗EHEC-O157∶H7特异性单克隆抗体，其它四株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Western blotting表明，C3、E7和F1三株mAbs在蛋白分子量28kD处有特异性条带，2E7、D3和H7三株mAbs在蛋白分子量35kD处有特异性条带，而mAbs B8则未显示蛋白带。