O型口蹄疫病毒嵌合体的构建及病毒拯救

摘要

目的：口蹄疫(FMD)是当前危害猪、牛、羊等偶蹄动物的重要传染病，为了有效防控消灭该病，我国采取的是以免疫为主的综合防控措施，制苗毒株的选择是疫苗生产过程中考虑的最重要因素之一，因此本文旨在筛选或构建一株低致病力，免疫原性与田间流行毒株相匹配的制苗毒株。 方法：T7RNA聚合酶表达质粒，质粒p43-CHA90-LL由猪源O型口蹄疫制苗种毒p43-CHA90缺失Lpro构建而成。猪源流行毒株结构蛋白基因(P1区)由广东省动物疫控中心扩增提供。试验以构建成功的缺失Lpro基因的口蹄疫病毒毒株OZK/93为基础，删除结构蛋白VPl、VP2和VP3的编码基因，引入多克隆位点，构建成口蹄疫病毒的通用载体p43-CHA90-LL-Vector，在此载体的多克隆位点处插入广东省猪源流行毒株(GD16) Pl区基因中VP3、 VP2、VPl基因序列，拯救嵌合病毒，并传了3代，通过蚀斑试验、PT-PCR及测序检测病毒。 结果：通用载体p43-CHA90-LL-Vector构建成功；含流行毒株GD16的嵌合病毒构建成功；拯救出活病毒；RT-PCR及测序分析嵌合病毒未发生变异。