O型口蹄疫病毒VP1基因及IL-18基因重组痘苗病毒的构建及免疫原性初步研究

摘要

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。主要特征为口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱，被世界动物卫生组织列为A类传染病之首。该病不仅影响畜产品的生产，还可导致巨大的经济损失和严重的政治问题。本研究利用细胞内同源重组法将O型FMDV VP1基因以及白介素基因(IL-18)与痘苗病毒载体重组，以期获得针对口蹄疫病的免疫性强的重组痘苗病毒，为该病的预防提供理论基础。
　　 根据GenBank登录的O型口蹄疫病毒VP1基因和白介素基因(IL-18)序列，分别设计引物，PCR扩增得到VP1基因和IL-18基因。将鉴定正确的VP1和IL-18基因克隆到VV(Vaccinia Virus)重组载体上，构建含有VP1和IL-18基因的重组痘苗病毒转移载体。将构建好的这两个痘苗病毒转移载体与痘病毒弱毒株共转染BHK细胞，经筛选、鉴定从而得到rVV-VP1和rVV-IL18两株重组痘苗病毒，并对rVV-VP1的细胞裂解物表达的VP1蛋白进行Western blot检测，利用正向间接血凝抗原实验来检测rVV-VP1株免疫小鼠后其体内抗体水平。
　　 本研究把试验动物分为四组：分别为rVV-vp1组、rVV-VP1+rVV-IL18组、灭活的牛O型口蹄疫疫苗、牛O型口蹄疫合成肽疫苗。实验结果表明，rVV-VP1+rVV-IL18组产生的抗体效价高于rVV-vp1组体现了IL-18可能成为疫苗免疫佐剂的良好前景，也为进一步开展rVV活载体疫苗的研制及相关基础研究提供了技术支持。