牛奶中孕酮直接竞争ELISA检测方法的建立

摘要

采用直接竞争ELISA方法检测牛奶中孕酮含量。采用碳化二亚胺法，应用辣根过氧化物酶(HRP)标记11-a羟基孕酮琥珀酸酯(11α—OH-P4-HS)，制备孕酮酶标抗原；酶标抗原与牛奶样品中的孕酮共同竞争结合固相包被的孕酮单克隆抗体，建立直接竞争ELISA反应体系。实验结果表明，最佳抗体包被浓度为1：2000，最佳酶标抗原工作浓度为1：16000，建立的标准曲线为y=-2．4598x+0．999(R2=0．996)，牛奶中孕酮检测范围0．12～40ng／mL，最低检测量为0．12ng／mL，批内和批间变异系数分别为1．63％和2．49％。成功建立了可用于牛乳中孕酮快速检测的直接竞争ELISA方法。