猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因真核表达质粒的构建及其免疫原性的初步研究

摘要

参照GenBank公布的PCV2基因序列,设计合成一对引物,对疑似仔猪衰竭综合征的病料进行PCR检测,将PCR检测为阳性的病料接种PK15细胞,盲传6代后通过电镜观察和进一步的PCR检测证实分离出PCV2四川毒株1株,命名为PCVwhn株.提取病毒DNA,依据GenBank已发表的PCV2基因序列设计合成一对引物,通过PCR扩增出PCVwhn株的全基因组序列,序列分析表明该毒株的全基因组为1767bp,与国内外分离株的同源率为94.2％～97.5％.通过PCR方法获取猪圆环病毒PCVwhn株编码CAP蛋白的基因(ORF2),将ORF2基因插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中构建出真核表达质粒pcDNA-PCV-ORF2.将该质粒DNA肌肉注射免疫小白鼠,用ELISA诊断试剂盒检测小白鼠的血液中特异性抗体情况.结果:小白鼠在第2周产生了抗猪圆环病毒的特异性抗体,第4周抗体水平达到最高,抗体可维持8周以上,表明构建的真核表达质粒具有较好的免疫原性,为进一步研究猪圆环病毒Ⅱ型的DNA疫苗打下了基础。