HPLC-UV法测定多组分肺炎球菌表面蛋白A疫苗中相关抗原的含量

摘要

目的：建立一种检测多组分肺炎球菌表面蛋白A(PspA)疫苗相关抗原(PspA-RX1、PspA-3296和PspA-5668)纯度和含量的HPLC-UV方法.方法：采用高效液相色谱法,以丁烷基硅烷键合硅胶为填充剂(C4-300,2.1mm×150mm),以0.05％TFA水溶液(A)和0.05％乙腈溶液(B)为流动相,进样量为20μl,流速为每分钟0.2ml进行梯度洗脱,采用紫外检测器进行检测.结果：HPLC-UV方法可以同时检测多组分PspA蛋白疫苗中PspA-RX1、PspA-3296和PspA-5668三个蛋白的含量:PspA-RX1峰面积(Y)与浓度(X)在9.16～31.65μg·ml-1范围内具有良好线性关系,Y=143628X-306906,R2=0.9989,PspA-RX1的检测限为0.06μg,定量限为0.18μg,定量限的RSD值为1.52％;PspA-3296峰面积(Y)与浓度(X)在9.67～38.68μg·ml-1范围内具有良好线性关系,Y=201286X-463769,R2=0.9987,PspA-3296的检测限为0.06μg,定量限为0.19μg,定量限的RSD值为1.39％;PspA-5668峰面积(Y)与浓度(X)在9.60～38.41μg·ml-1范围内具有良好线性关系,Y=106462X-352048,R2=0.9944,PspA-5668的检测限为0.06μg,定量限为0.19μg,定量限的RSD值为1.67％;样品中PspA-RX1、PspA-3296和PspA-5668含量测定的重复性的RSD分别为1.28％、1.29％和1.99％(n=6).结论：本研究中建立的HPLC-UV方法能够简便和准确地对多组分PspA蛋白疫苗中的抗原组分进行定量检测.