猪黑素皮质激素受体-4基因(MC4R)启动子克隆及其分析

摘要

本研究旨在对猪MC4R基因的转录调控机制进行初步探讨.首先通过PCR方法扩增MC4R基因5′上游启动区1 234 bp(-1 264 bp ～-31 bp)的片段,再利用生物信息学方法对这一区域内潜在的转录起始位点进行了预测,最后采用步移缺失获得了11段长度不等的启动子片段,并分别克隆到荧光素酶(LUC)报告基因表达质粒中.同时,通过双荧光素酶报告活性分析检测MC4R基因启动子区不同长度片段在猪上皮型肾细胞(PK15)中瞬时转染后的活性.结果表明,猪MC4R 5′端-682处存在1个潜在的转录起始位点(TSS),细胞检测结果显示-514～-486区域内存在控制MC4R基础转录活性的顺式调控元件,推测该序列内的热休克转录因子(HSF)结合位点可能对MC4R基因的表达调控及功能行使具有重要作用.