自噬在铜诱导鸡肝细胞氧化应激和线粒体功能障碍中的作用

摘要

为了研究自噬在铜(Copper,Cu)诱导鸡肝细胞氧化应激和线粒体功能障碍中的作用,本研究以鸡原代肝细胞为模型,以不同浓度(0、10、50、100μmol/L)的Cu染毒,电子显微镜观察自噬小体,Real-Time PCR检测自噬相关基因Becline1、ATG5、LC3A、LC3B、mTOR和Dynien的mRNA转录水平,Western-blotting检测细胞BECN1和LC3蛋白表达水平,并检测了自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)作用后细胞存活率、抗氧化指标、活性氧(reactiveoxygen species,ROS)及线粒体质量、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)合成的变化.结果显示,Cu可引起肝细胞自噬体数量增加,自噬相关基因表达上调(P＜0.05),促使BECN1蛋白水平的升高(P＜0.05)和LC3A向LC3B的转化(P＜0.05);3-MA与Cu共作用和Cu单独作用相比,细胞存活率明显降低(P＜0.05),细胞功能酶LDH、AST和ALT释放明显增加(P＜0.05),抗氧化指标MDA含量明显升高(P＜0.05),线粒体质量和MMP下降更为严重(P＜0.05),ATP含量显著降低(P＜0.05).表明Cu能诱导鸡原代肝细胞发生自噬,自噬在Cu引起的肝细胞氧化应激和线粒体功能障碍过程中起保护作用.