基于内参系统的阪崎肠杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

本文针对婴幼儿食品中阪崎肠杆菌ompA靶基因保守序列,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并加入内参(IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量PCR检测方法.结果表明,该方法对阪崎肠杆菌基因组DNA的最低检测限为1pg/μL;对含有靶基因质粒的最低检测限为103copies/μL;对细菌的最低检测限为1×104CFU/mL;Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R2=0.999).人工污染试验结果表明,在初始菌量为10CFU/25g奶粉样品时,采用水洗加试剂盒法和水煮法提取DNA,阪崎肠杆菌均在增菌10h时检出.本文建立的阪崎肠杆菌实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中阪崎肠杆菌,又能实时监测PCR反应过程,有效防止“假阴性”的发生.