基于同源加尾系统的改良分子信标荧光PCR检测香港海鸥形菌方法的建立

摘要

目的：针对香港海鸥形菌,利用同源加尾系统(Homo-Tag Assisted Non-Dimer,简称HAND)建立一种基于改良分子信标的荧光PCR检测方法,并对这种方法进行条件优化和评价. 方法：根据香港海鸥形菌的基因保守序列16S-rDNA基因设计探针和特异性引物,并在引物的5'端加上同源尾巴序列,减少或避免引物二聚体的形成,通过优化通用尾巴引物和特异性加尾引物的浓度与反应温度等PCR参数构建荧光PCR的反应体系. 结果：建立的基于HAND系统的改良分子信标PCR的检测体系引物二聚体明显减少,检出限达到20CFU/ml. 结论：建立的基于HAND系统的改良分子信标荧光PCR检测方法具有检测时间短、灵敏度高、特异性好的优点,能够应用于香港海鸥形菌的快速筛查.