产单核李斯特菌的改良分子信标荧光PCR-磁捕获快速检测体系的建立

摘要

[目的]建立改良分子信标荧光PCR-磁捕获快速检测产单核李斯特菌(LMO)的体系,应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。[方法]根据GenBank公布的LMOhlyA基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标荧光PCR检测体系。运用磁捕获材料对PCR检测阳性的增菌液进一步处理后划平皿做分离培养。[结果]改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg,菌液灵敏度为99cfu/ml或4cfu/PCR反应体系,无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO,均出现特异的荧光信号。对228份食品进行LMO检测,8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性。用磁捕获材料处理此8份增菌液,全部细菌培养阳性,高于国标法的6份阳性。[结论]改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高,特异性强,运用磁捕获试剂能有效提高培养阳性率。应用该检测系统能提高LMO的检出率和准确性。该系统可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。