产气荚膜梭菌α-β2-ε毒素在大肠杆菌中的表达及免疫原性研究

摘要

本研究通过PCR分别扩增α-β2,ε毒素基因,以pProHTa作为表达载体,构建了重组表达质粒pProHTa-α-β2-ε,并转入大肠杆菌中,经IPTG诱导表达α-β2-ε毒素蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的毒素蛋白大小约92.4 ku,主要以包涵体形式存在.免疫6～8周龄BALB/c小鼠,分别用A型和B型产气荚膜梭菌强毒株对免疫鼠进行攻毒,测定免疫鼠血清中抗体的中和活性,结果表明,免疫鼠对A型产气荚膜梭菌强毒株1 LD100和2LD1m的攻毒保护率分别为100％和60％,对B型产气荚膜梭菌强毒株1 LD100和2 LD100的攻毒保护率分别为100％和80％.免疫鼠血清可体外中和A、B型产气荚膜梭菌强毒株产生的毒素.血清稀释为1∶20时(血清效价为218),对1 LD100A型和B型产气荚膜梭菌毒素的中和效率均可达到100％.以上结果表明,本研究构建的重组大肠杆菌表达的α-β2-ε融合蛋白具有良好的免疫原性,能有效刺激机体产生中和抗体,可作为基因工程疫苗的有效组分,为产气荚膜梭菌多价候选亚单位疫苗的研究奠定了基础.