靶向HIV Tat-TAR的抑制剂活性评价新方法的研究

摘要

在HIV生命周期中,病毒反式激活蛋白Tat与反式激活应答序列TAR RNA的识别与相互作用是HIV基因表达调控中的关键环节.根据Tat对TAR分子识别的关键因素以及TAR RNA序列具有高度保守和相对不易变异的特性,建立了基因水平靶向HIV Tat-TAR的抑制剂活性评价新方法,即将以HIV LTR为启动子,含有氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的质粒与Tat表达质粒瞬时共转染293T细胞,通过ELISA方法检测报告基因CAT的活性,考察化合物对Tat反式激活作用的影响.通过对本课题组自行设计的以TAR RNA为靶的β-咔啉系列、异喹啉系列、海藻糖系列和博莱霉素系列等化合物抑制Tat反式激活活性的评价验证了该方法的普遍应用性.应用SIV-CEM×174系统考察了4个系列化合物的抗病毒活性,结果表明化合物抗SIV的活性与其对Tat反式激活的抑制活性相一致,从而验证了该方法的可靠性.此方法针对明确靶点,不依赖于P3实验室的苛刻条件,而且用ELISA的方法代替了放射性同位素的使用,相对于传统方法更为简便、快捷、灵敏而且重视性好.对其中部分活性较好的化合物进行抗HIV的体外细胞筛选结果更进一步说明我们所建立的靶向HIV Tat-TAR的抑制剂活性评价方法为抗HIV药物的筛选开辟了新的途径.